促泌素在ox-LDL诱导胰岛β细胞内质网应激中的调控作用及机制

发布时间：2022-10-29 11:15

　　目的:探究促泌素（secretagogin,SCGN）在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导胰岛β细胞内质网应激及细胞凋亡发生中的调控作用及分子机制。方法:1.通过油红O染色、BODIPY染色、CCK8实验、流式细胞术分别检测经不同浓度ox-LDL处理小鼠胰岛MIN6细胞后脂质蓄积、细胞活力及细胞凋亡情况。2.运用蛋白质免疫印迹实验（western blot,WB）检测SCGN、内质网应激相关蛋白（PERK,p-PERK,p-eIF2α,eIF2α,ATF4,CHOP）及凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3的蛋白表达水平。3.采用siRNA技术降低MIN6细胞SCGN表达水平,进而观察SCGN-siRNA与ox-LDL（40μg/ml）处理组细胞内质网应激相关蛋白（PERK,p-PERK,p-eIF2α,eIF2α,ATF4,CHOP）及凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3的表达变化。4.构建SCGN重组质粒（recombinant SCGN,rSCGN）转染MIN6细胞,构建稳定高表达SCGN细胞株。通过流式细胞术及WB实验检测空白对照组（control）、ox-LD... 

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略词表
第1章 前言
第2章 实验材料
    2.1 细胞株
    2.2 siRNA及质粒
    2.3 主要药品和试剂、试剂盒
    2.4 主要试剂的配制
    2.5 主要仪器和设备
第3章 实验方法
    3.1 细胞培养
    3.2 油红O染色
    3.3 BODIPY染色
    3.4 CCK-8实验
    3.5 SCGN真核表达质粒的构建及转染
    3.6 siRNA转染
    3.7 流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)
    3.8 蛋白结合位点预测
    3.9 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)
    3.10 免疫共沉淀实验(CO-IP)
    3.11 数据分析
第4章 实验结果
    4.1 不同浓度的ox-LDL对 MIN6 细胞脂质蓄积的影响
    4.2 ox-LDL诱导MIN6 细胞凋亡及降低细胞活力
    4.3 ox-LDL激活MIN6 细胞内质网应激及下调SCGN的表达
    4.4 低表达SCGN可通过ATF4 通路激活MIN6 细胞内质网应激
        4.4.1 瞬时转染SCGN-siRNA对 SCGN沉默效率的鉴定
        4.4.2 低表达SCGN通过ATF4 通路激活内质网应激
    4.5 rSCGN可部分拮抗ox-LDL诱导的MIN6 细胞内质网应激及凋亡
        4.5.1 rSCGN可部分拮抗ox-LDL诱导的MIN6 细胞凋亡
        4.5.2 rSCGN通过拮抗ox-LDL诱导的MIN6 细胞内质网应激进而抑制细胞凋亡
    4.6 SCGN与 ATF4 之间存在相互作用关系
第5章 讨论
第6章 实验结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间科研成果
致谢



本文编号：3697587