SIRT1介导的p53和FOXOs在氟诱导的小鼠MC3T3-E1细胞凋亡和自噬中的调控作用
发布时间：2023-02-26 14:36
氟对牙齿和骨骼的生长发育至关重要,但是过量氟能造成牙齿、骨骼和其他组织的损伤,严重威胁公共卫生安全。研究表明,氟导致细胞凋亡与自噬,然而它们之间的相互作用关系尚不明确。SIRT1,作为一种去乙酸化酶,能够对多种生理病理过程如细胞凋亡、增殖、自噬、代谢与细胞周期等进行调控。因此,本文旨在以MC3T3-E1细胞为研究对象,探究细胞自噬和SIRT1在氟诱导的细胞凋亡中的作用,阐明SIRT1对细胞凋亡与自噬的调控机制。首先,采用不同浓度的氟化钠处理MC3T3-E1细胞,建立氟诱导的MC3T3-E1细胞凋亡与自噬模型,使用光学显微镜观察细胞形态的变化,AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞凋亡,PI单染检测细胞周期,DCFH-DA探针检测ROS,MDC染色观察细胞自噬小体,RT-qPCR和Westernbloting检测凋亡和自噬相关的蛋白水平。试验结果表明随着氟浓度的增加细胞凋亡率增加;Caspase-3 mRNA的表达量上升。高浓度(1、2、3、4、5)×10-3mol/L的氟化钠处理细胞后,细胞逐渐收缩和变圆,贴壁细胞逐渐减少;细胞内ROS水平显著增高;细胞内Bax/Bcl-2蛋白表...
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词对照表
第一章 文献综述
1.1 氟中毒的研究现状及进展
1.2 氟中毒与骨损伤
1.3 氟与骨细胞
1.4 氟的作用过程
1.4.1 细胞呼吸链
1.4.2 细胞内膜渗透性与膜电位
1.4.3 ROS的产生
1.4.4 细胞坏死
1.4.5 凋亡
1.4.6 分泌,运输与回收小泡
1.4.7 转运蛋白
1.4.8 钙与磷酸转运蛋白
1.4.9 葡萄糖转运
1.4.10 Na+/K+-ATPase
1.4.11 囊性纤维化跨膜传导调节蛋白
1.4.12 转录作用
1.4.13 炎症反应
1.4.14 细胞迁移
1.4.15 细胞增殖与细胞周期
1.5 细胞凋亡与自噬的关系
1.5.1 TOR激酶路径在自噬与凋亡中的作用
1.5.2 Beclin 1在自噬与凋亡中的作用
1.5.3 Caspases对自噬的调控
1.5.4 抗凋亡FLIPs对自噬的调控
1.5.5 死亡相关蛋白激酶家族在凋亡与自噬中的作用
1.5.6 p53在凋亡与自噬中的作用
1.6 SIRT1在细胞凋亡与自噬中的作用
1.6.1 Sirtuins的发现过程
1.6.2 Sirtuins参与的生物学功能
1.6.3 SIRT1的调节机制
1.7 研究目的与意义
第二章 氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞凋亡
2.1 引言
2.2 材料
2.2.1 细胞类型
2.2.2 主要仪器和耗材
2.2.3 主要试剂和试剂盒
2.2.4 实验所用溶液及其配制
2.3 方法
2.3.1 MC3T3-E1细胞培养
2.3.2 细胞传代
2.3.3 细胞冻存与复苏
2.3.4 实验分组
2.3.5 Annexin V-FITC/PI流式双染色检测氟诱导的MC3T3-E1细胞凋亡
2.3.6 RT-qPCR检测氟诱导的MC3T3-E1细胞凋亡
2.3.7 Western bloting检测氟诱导的MC3T3-E1细胞凋亡
2.3.8 显微镜观察高氟环境下MC3T3-E1细胞形态变化的影响
2.3.9 荧光显微镜检测氟诱导的MC3T3-E1细胞内ROS水平的变化
2.3.10 PI流式染色检测氟诱导的MC3T3-E1细胞周期变化
2.3.11 数据处理与统计
2.4 结果
2.4.1 氟化钠对MC3T3-E1细胞凋亡的影响
2.4.2 氟化钠对MC3T3-E1细胞凋亡相关蛋白表达的影响
2.4.3 氟化钠对MC3T3-E1细胞形态学变化的影响
2.4.5 氟化钠对MC3T3-E1细胞内ROS水平的影响
2.4.6 氟化钠对MC3T3-E1细胞周期的影响
2.5 讨论
2.6 小结
第三章 氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬
3.1 引言
3.2 材料
3.2.1 主要仪器与耗材
3.2.2 主要试剂和试剂盒
3.2.3 MC3T3-E1细胞培养
3.2.4 实验分组
3.2.5 RT-qPCR检测氟诱导的MC3T3-E1细胞自噬
3.2.6 Western bloting检测氟诱导的MC3T3-E1细胞自噬
3.2.7 MDC法检测氟诱导的MC3T3-E1细胞自噬
3.2.8 数据处理与统计
3.3 结果
3.3.1 氟化钠对MC3T3-E1细胞自噬相关蛋白表达的影响
3.3.2 氟化钠对MC3T3-E1细胞内自噬小体的影响
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 SIRT1在MC3T3-E1细胞凋亡与自噬中的作用
4.1 引言
4.2 材料
4.2.1 主要仪器与耗材
4.2.2 主要试剂与试剂盒
4.2.3 MC3T3-E1细胞培养
4.2.4 实验分组
4.2.5 RT-qPCR检测氟化钠对MC3T3-E1细胞内SIRT1 mRNA表达变化的影响
4.2.6 SIRT1激活物SRT1720与抑制物Ex-527对MC3T3-E1细胞存活率的影响
4.2.7 荧光显微镜检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞内ROS水平变化的影响
4.2.8 PI流式染色检测氟诱导的MC3T3-E1细胞周期变化
4.2.9 Annexin V-FITC/PI流式双染色检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的影响
4.2.10 Western bloting检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的影响
4.2.11 MTT法检测氟环境下SIRT1与自噬对MC3T3-E1细胞存活率的影响
4.2.12 显微镜观察自噬对暴露于高氟环境下MC3T3-E1细胞形态变化的影响
4.2.13 RT-qPCR检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬的影响
4.2.14 Western bloting检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬的影响
4.2.15 荧光显微镜检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬的影响
4.2.16 激光共聚焦显微镜检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬的影响
4.2.17 Western bloting检测氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬中SIRT1介导的细胞路径
4.2.18 数据处理与统计
4.3 结果
4.3.1 氟化钠对SIRT1的影响
4.3.2 SIRIT1激活物SRT1720,抑制物Ex-527对MC3T3-E1细胞存活率的影响
4.3.3 SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的影响
4.3.4 SIRT1对氟环境下MC3T3-E1细胞内ROS水平的影响
4.3.5 氟环境下SIRT1对MC3T3-E1细胞周期的影响
4.3.6 SIRT1在氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞凋亡中介导的细胞路径
4.3.7 氟环境下SIRT1对MC3T3-E1细胞存活率的影响
4.3.8 自噬对暴露于氟环境下MC3T3-E1细胞存活率的影响
4.3.9 自噬对暴露于高氟环境下MC3T3-E1细胞形态变化的影响
4.3.10 SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬的影响
4.3.11 SIRT1在氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬中介导的细胞路径
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 结论和创新点
5.1 结论
5.2 创新点
5.3 研究展望
参考文献
致谢
个人简介
本文编号：3750482
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词对照表
第一章 文献综述
1.1 氟中毒的研究现状及进展
1.2 氟中毒与骨损伤
1.3 氟与骨细胞
1.4 氟的作用过程
1.4.1 细胞呼吸链
1.4.2 细胞内膜渗透性与膜电位
1.4.3 ROS的产生
1.4.4 细胞坏死
1.4.5 凋亡
1.4.6 分泌,运输与回收小泡
1.4.7 转运蛋白
1.4.8 钙与磷酸转运蛋白
1.4.9 葡萄糖转运
1.4.10 Na+/K+-ATPase
1.4.11 囊性纤维化跨膜传导调节蛋白
1.4.12 转录作用
1.4.13 炎症反应
1.4.14 细胞迁移
1.4.15 细胞增殖与细胞周期
1.5 细胞凋亡与自噬的关系
1.5.1 TOR激酶路径在自噬与凋亡中的作用
1.5.2 Beclin 1在自噬与凋亡中的作用
1.5.3 Caspases对自噬的调控
1.5.4 抗凋亡FLIPs对自噬的调控
1.5.5 死亡相关蛋白激酶家族在凋亡与自噬中的作用
1.5.6 p53在凋亡与自噬中的作用
1.6 SIRT1在细胞凋亡与自噬中的作用
1.6.1 Sirtuins的发现过程
1.6.2 Sirtuins参与的生物学功能
1.6.3 SIRT1的调节机制
1.7 研究目的与意义
第二章 氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞凋亡
2.1 引言
2.2 材料
2.2.1 细胞类型
2.2.2 主要仪器和耗材
2.2.3 主要试剂和试剂盒
2.2.4 实验所用溶液及其配制
2.3 方法
2.3.1 MC3T3-E1细胞培养
2.3.2 细胞传代
2.3.3 细胞冻存与复苏
2.3.4 实验分组
2.3.5 Annexin V-FITC/PI流式双染色检测氟诱导的MC3T3-E1细胞凋亡
2.3.6 RT-qPCR检测氟诱导的MC3T3-E1细胞凋亡
2.3.7 Western bloting检测氟诱导的MC3T3-E1细胞凋亡
2.3.8 显微镜观察高氟环境下MC3T3-E1细胞形态变化的影响
2.3.9 荧光显微镜检测氟诱导的MC3T3-E1细胞内ROS水平的变化
2.3.10 PI流式染色检测氟诱导的MC3T3-E1细胞周期变化
2.3.11 数据处理与统计
2.4 结果
2.4.1 氟化钠对MC3T3-E1细胞凋亡的影响
2.4.2 氟化钠对MC3T3-E1细胞凋亡相关蛋白表达的影响
2.4.3 氟化钠对MC3T3-E1细胞形态学变化的影响
2.4.5 氟化钠对MC3T3-E1细胞内ROS水平的影响
2.4.6 氟化钠对MC3T3-E1细胞周期的影响
2.5 讨论
2.6 小结
第三章 氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬
3.1 引言
3.2 材料
3.2.1 主要仪器与耗材
3.2.2 主要试剂和试剂盒
3.2.3 MC3T3-E1细胞培养
3.2.4 实验分组
3.2.5 RT-qPCR检测氟诱导的MC3T3-E1细胞自噬
3.2.6 Western bloting检测氟诱导的MC3T3-E1细胞自噬
3.2.7 MDC法检测氟诱导的MC3T3-E1细胞自噬
3.2.8 数据处理与统计
3.3 结果
3.3.1 氟化钠对MC3T3-E1细胞自噬相关蛋白表达的影响
3.3.2 氟化钠对MC3T3-E1细胞内自噬小体的影响
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 SIRT1在MC3T3-E1细胞凋亡与自噬中的作用
4.1 引言
4.2 材料
4.2.1 主要仪器与耗材
4.2.2 主要试剂与试剂盒
4.2.3 MC3T3-E1细胞培养
4.2.4 实验分组
4.2.5 RT-qPCR检测氟化钠对MC3T3-E1细胞内SIRT1 mRNA表达变化的影响
4.2.6 SIRT1激活物SRT1720与抑制物Ex-527对MC3T3-E1细胞存活率的影响
4.2.7 荧光显微镜检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞内ROS水平变化的影响
4.2.8 PI流式染色检测氟诱导的MC3T3-E1细胞周期变化
4.2.9 Annexin V-FITC/PI流式双染色检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的影响
4.2.10 Western bloting检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的影响
4.2.11 MTT法检测氟环境下SIRT1与自噬对MC3T3-E1细胞存活率的影响
4.2.12 显微镜观察自噬对暴露于高氟环境下MC3T3-E1细胞形态变化的影响
4.2.13 RT-qPCR检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬的影响
4.2.14 Western bloting检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬的影响
4.2.15 荧光显微镜检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬的影响
4.2.16 激光共聚焦显微镜检测SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬的影响
4.2.17 Western bloting检测氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬中SIRT1介导的细胞路径
4.2.18 数据处理与统计
4.3 结果
4.3.1 氟化钠对SIRT1的影响
4.3.2 SIRIT1激活物SRT1720,抑制物Ex-527对MC3T3-E1细胞存活率的影响
4.3.3 SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的影响
4.3.4 SIRT1对氟环境下MC3T3-E1细胞内ROS水平的影响
4.3.5 氟环境下SIRT1对MC3T3-E1细胞周期的影响
4.3.6 SIRT1在氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞凋亡中介导的细胞路径
4.3.7 氟环境下SIRT1对MC3T3-E1细胞存活率的影响
4.3.8 自噬对暴露于氟环境下MC3T3-E1细胞存活率的影响
4.3.9 自噬对暴露于高氟环境下MC3T3-E1细胞形态变化的影响
4.3.10 SIRT1对氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬的影响
4.3.11 SIRT1在氟化钠诱导的MC3T3-E1细胞自噬中介导的细胞路径
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 结论和创新点
5.1 结论
5.2 创新点
5.3 研究展望
参考文献
致谢
个人简介
本文编号：3750482
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/nfm/3750482.html
