人源内皮克隆形成细胞（ECFCs）旁分泌对成熟血管和皮肤细胞生物学影响的实验研究

发布时间：2023-03-01 18:39

　　研究背景和目的:2型糖尿病(T2D)是最常见的代谢性疾病之一,其主要特征是由于胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗而出现慢性高血糖。慢性创伤具有特征性的病理联系,不能通过有序和及时的修复来恢复结构和功能的完整性。在糖尿病患者中,每年有2%-3%的患者发生足部溃疡。糖尿病足是一种严重的T2D并发症,常导致疼痛、痛苦和生活质量低下。内皮克隆形成细胞(Endothelial colony-forming cells,ECFCs)被认为晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs),在创伤修复中的作用受到广泛关注。ECFCs是一种来源于骨髓的原始细胞,在一定的条件下可诱导分化成为成熟的内皮细胞(endothelial cells,ECs)。该细胞不仅参与胚胎时期的血管生成,而且在人体出生后的血管新生、血管损伤的内皮修复以及功能维持中仍然有重要的作用。干/祖细胞对创面的修复机制可概括为:(1)分化为成熟内皮细胞;(2)旁分泌产生多种生物活性的细胞因子促进创面的血管新生及神经再生。为此,我们推测内皮克隆形成细胞通过旁分泌机制可促进糖尿病患者慢性创面的愈合以及破损处血管再...

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【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
1 前言
2 实验材料
    2.1 一般资料
    2.2 主要仪器
    2.3 实验试剂
3 实验方法
    3.1 ECFCs细胞的提取
    3.2 ECFCs细胞传代
    3.3 ECFCs细胞冻存
    3.4 ECFCs表面抗原检测
    3.5 ECFCs检测鉴定--免疫荧光标记
    3.6 Matrigel基质胶成管实验
    3.7 细胞条件培养基ECFCs-CM的制备
    3.8 抗体芯片检测ECFCs-CM中细胞因子表达
    3.9 ELISA法检测ECFCs-CM中细胞因子表达情况
    3.10 CCK8检测ECFCs-CM对HUVECs和HDFs增殖能力的影响
    3.11 迁移--划痕实验
    3.12 迁移--transwell共培养
    3.13 细胞凋亡
    3.14 细胞周期检测
    3.15 丝素蛋白/海藻酸钠水凝胶的制备及表征检测
4 数据处理和统计学分析
5 结果
    5.1 ECFCs培养及传代
    5.2 免疫荧光染色ECFCs检测鉴定
    5.3 流式细胞仪检测ECFCs表面抗原检测鉴定
    5.4 ECFCs细胞的成管能力检测
    5.5 抗体芯片法检测ECFCs-CM细胞因子表达
    5.6 ELISA法检测ECFCs-CM中细胞因子表达情况
    5.7 CCK-8法检测ECFCs-CM对HUVECs增殖能力的影响
    5.8 CCK-8法检测ECFCs-CM对HDFs增殖能力的影响
    5.9 细胞划痕法检测ECFCs-CM对HUVECs迁移能力的影响
    5.10 细胞划痕法检测ECFCs-CM对HDFs迁移能力的影响
    5.11 Transwell间接共培养法检测ECFCs-CM对HUVECs迁移能力的影响
    5.12 Transwell间接共培养法检测ECFCs-CM对HDFs迁移能力的影响
    5.13 流式细胞仪法检测ECFCs-CM对HUVECs和HDFs细胞凋亡的影响
    5.14 流式细胞仪检测ECFCs-CM对HUVECs细胞周期的影响
    5.15 流式细胞仪检测ECFCs-CM对HDFs细胞周期的影响
    5.16 SF/ALG水凝胶合成大体形态观察
    5.17 SF/ALG水凝胶傅里叶变换红外光谱(FTIR)分析
    5.18 SF/ALG水凝胶孔隙率分析
6 讨论
    6.1 为什么选择人源性ECFCs作为糖尿病慢性损伤修复的细胞
    6.2 如何通过表面抗原检测鉴定ECFCs细胞
    6.3 为何采用抗体芯片法对ECFCs-CM中细胞因子进行检测
    6.4 ECFCs-CM中细胞因子表达情况的分析
    6.5 ECFCs-CM对HUVECs和HDFs增殖能力的影响
    6.6 胞划痕法检测ECFCs-CM对HUVECs和HDFs迁移能力的影响
    6.7 Transwell间接共培养法检测ECFCs-CM对HUVECs和HDFs迁移能力的影响
7 结论
8 展望
参考文献
综述
    参考文献
附录
攻读学位期间科研著作情况
致谢



本文编号：3752024