特异性组蛋白去乙酰化酶8抑制剂通过调控Galectin-3抑制M2型巨噬细胞极化治疗哮喘及其机制研究

发布时间：2023-03-14 18:51

　　研究背景:支气管哮喘是严重影响人们健康的常见慢性疾病之一,其病理变化为:气道炎症、气道重塑和气道高反应。目前支气管哮喘的治疗仍以缓解症状和控制炎症为主。糖皮质激素仍是目前治疗哮喘的最有效的药物。组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylases,HDACs)是维持染色体基本单位核小体中组蛋白乙酰化平衡的关键酶之一,与细胞内诸多生命过程密切相关,如炎症基因转录、DNA损伤修复、细胞增殖与凋亡、组织纤维化等。本课题组在前期研究工作中,通过建立急性及慢性OVA哮喘小鼠模型,证实广谱HDAC抑制剂(Givinostat)、HDAC6抑制剂(Tubastatin A Hcl)和HDAC8抑制剂(PCI-34051)可缓解慢性哮喘小鼠的气道炎症、气道高反应和气道重塑,对支气管哮喘小鼠有治疗作用。其中,HDAC8抑制剂在哮喘中,抗炎作用明显优于广谱HDAC抑制剂及HDAC6抑制剂,表现为在哮喘中,HDAC8抑制剂能更好的缓解气道炎症及气道高反应性。巨噬细胞在不同环境下可以分别极化为经典活化型巨噬细胞(M1型)及替代活化型巨噬细胞(M2型)。研究表明,巨噬细胞M2型极化在哮喘的发病过程中起着重...

【文章页数】：105 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 HDAC8特异性的抑制剂PCI-34051对急性期哮喘小鼠肺组织内巨噬细胞M2型极化的影响
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料与试剂
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要实验器材
            2.1.4 实验试剂的配置
        2.2 实验方法
            2.2.1 动物模型的制备和分组
            2.2.2 肺功能激发试验
            2.2.3 ELISA检测血清中炎症因子水平
            2.2.4 BALF中炎症细胞总数及分类计数
            2.2.5 小鼠肺组织的处理
            2.2.6 肺组织HE染色
            2.2.7 AB-PAS染色观察肺组织气道上皮粘液腺化生
            2.2.8 肺组织流式细胞术
            2.2.9 肺组织Q-PCR检测
            2.2.10 免疫组织化学染色法检测肺组织内CD68,CD86,CD163 表达
            2.2.11 Western Blot检测肺组织内Arg1及i NOS蛋白表达水平
            2.2.12 统计学处理
    3 实验结果
        3.1 特异性HDAC8抑制剂(PCI-34051)可减轻气道高反应
        3.2 特异性HDAC8抑制剂(PCI-34051)可减轻气道周围炎症
        3.3 特异性HDAC8抑制剂(PCI-34051)减少急性期哮喘小鼠肺泡灌洗液(BALF)内巨噬细胞总数
        3.4 特异性HDAC8抑制剂(PCI-34051)抑制急性期哮喘小鼠气道上皮杯状细胞化生
        3.5 特异性HDAC8抑制剂(PCI-34051)降低血清中IL-4及Ig E分泌
        3.6 特异性HDAC8抑制剂(PCI-34051)抑制小鼠肺组织巨噬细胞M2 型极化
        3.7 特异性HDAC8抑制剂(PCI-34051)抑制CD68,CD163表达
        3.8 特异性HDAC8抑制剂(PCI-34051)抑制M2型巨噬细胞标志物Arg1 mRNA表达
        3.9 特异性HDAC8抑制剂(PCI-34051)抑制Arg1蛋白表达
    4 讨论
    5 结论
第二部分 HDAC8特异性抑制剂对急性期哮喘小鼠肺组织内Galecitn-3的作用
    6 前言
    7 材料和方法
        7.1 主要试剂与实验仪器
        7.2 实验方法
            7.2.1 实验模型的制备及分组
            7.2.2 免疫组织化学染色法检测肺组织内HDAC8及Galectin-3表达
            7.2.3 Western Blot检测肺组织内HDAC8及Galectin-3蛋白表达
            7.2.4 免疫荧光
            7.2.5 统计学处理
    8 结果
        8.1 HDAC8特异性抑制剂可以抑制急性期哮喘小鼠肺组织内HDAC8表达
        8.2 HDAC8特异性抑制剂PCI-34051可以抑制急性期哮喘小鼠肺组织内HDAC8蛋白表达
        8.3 HDAC8特异性抑制剂PCI-34051可以抑制急性期哮喘小鼠肺组织内Galecitn-3表达
        8.4 HDAC8特异性抑制剂PCI-34051可减轻小鼠肺组织中Galectin-3的蛋白表达水平
        8.5 HDAC8特异性抑制剂抑制Galecitn-3及HDAC8共表达
    9 讨论
    10 结论
第三部分 PCI-34051对于Raw264.7 细胞M2 型极化的作用及作用机制
    11 前言
    12 材料与方法
        12.1 细胞来源
        12.2 主要实验试剂
        12.3 主要实验仪器
        12.4 实验方法
            12.4.1 细胞培养
            12.4.2 细胞处理及分组
            12.4.3 实时荧光定量PCR
            12.4.4 Western Blot检测细胞内ArgⅠ、iNOS、Galecitn-3及HDAC8蛋白表达水平
            12.4.5 shRNA转染
            12.4.6 细胞免疫荧光
            12.4.7 细胞免疫共沉淀
            12.4.8 统计学处理
    13 结果
        13.1 HDAC8抑制剂抑制Raw264.7细胞M2型极化
        13.2 HDAC8抑制剂抑制Raw264.7细胞内Arg1蛋白表达
        13.3 Galectin-3 在巨噬细胞的M2型极化过程中起重要作用
        13.4 HDAC8抑制剂抑制Raw264.7细胞Galectin-3及HDAC8的表达
        13.5 HDAC8抑制剂抑制Galectin-3及HDAC8的共表达
        13.6 HDAC8抑制剂抑制Galectin-3及HDAC8的相互作用
    14 讨论
    15 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3762550