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Caveolin-1对2型糖尿病小鼠内皮祖细胞功能的影响研究

发布时间:2023-03-18 18:39
  目的:本研究旨在体外验证过表达和沉默表达Caveolin-1对2型糖尿病小鼠内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)功能、PI3K和AKT表达水平的影响。阐明Caveolin-1是否参与EPCs功能的调节,PI3K/AKT信号通路是否与Caveolin-1对EPCs功能的调节有关。方法:(1)EPCs原代培养及鉴定:体外分离培养8周龄雄性2型糖尿病db/db小鼠骨髓EPCs,采用密度梯度离心法获取单核细胞,再将单核细胞接种于纤维连接蛋白包被的培养瓶中进行培养传代;通过免疫荧光鉴定EPCs。(2)转染EPCs及检测转染效果:分别采用过表达慢病毒空白载体、过表达慢病毒载体、沉默表达慢病毒空白载体和沉默表达慢病毒载体转染EPCs。故本研究分为过表达空白载体组、过表达组、沉默表达空白载体组、沉默表达组和未转染的对照组。通过慢病毒感染效率探索各组慢病毒转染的最佳MOI值,确定转染时加入EPCs的病毒量。通过实时荧光定量PCR法(qPCR)分别检测各组慢病毒载体(包含3个沉默表达慢病毒载体和一个过表达慢病毒载体)转染EPCs后Caveolin-1的mRNA表...

【文章页数】:134 页

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