miR-219c-5p通过靶向FN1参与多发性硬化致神经源性膀胱纤维化的作用机制研究
发布时间：2023-04-02 13:47
背景和目的多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种慢性自身免疫性中枢神经系统疾病,多为神经系统白质发生多发性炎性改变,主要表现为局灶性炎性浸润、神经细胞脱髓鞘、神经轴突损伤、胶质纤维化增生及钙化等,是导致神经源性膀胱的第二大病因。据文献统计,大约有超过75%的MS患者可有不同程度的泌尿系统症状,轻者表现为尿频、尿急,重者表现为尿潴留、肾积水、膀胱纤维化等,严重影响患者的身心健康。目前MS致神经源性膀胱纤维化的分子机制尚未完全阐明。就目前诊疗MS致神经源性膀胱的手段而言,既往的治疗方法如使用抑制膀胱过度活动的药物来控制膀胱平滑肌的不随意收缩,虽然在短期内有一定的疗效,但长期效果不佳,且膀胱平滑肌细胞仍持续纤维化变性。而纤维蛋白链接因子1(Fibronectin 1,FN1)作为细胞外基质中的主要蛋白可能参与膀胱纤维化,且已有大量的文献证实miRNA与纤维化疾病的发生发展有着紧密联系。因此,本研究拟构建实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型用来模拟MS疾病的发生发展。并以此EAE模型...
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
1 前言
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 细胞来源
2.1.3 主要试剂
2.1.4 仪器和设备
2.2 方法
2.2.1 建立EAE小鼠模型
2.2.2 HE染色步骤
2.2.3 Masson染色步骤
2.2.4 预测可调控FN1合成的miRNA
2.2.5 膀胱平滑肌细胞鉴定步骤
2.2.6 转染miRNA类似物及拮抗剂
2.2.7 提取膀胱组织蛋白
2.2.8 膀胱平滑肌细胞总蛋白的提取
2.2.9 Western Blot步骤
2.2.10 膀胱组织总RNA的提取
2.2.11 膀胱平滑肌细胞RNA的提取
2.2.12 逆转录-聚合酶链反应RT-PCR
2.2.12.1 检测miRNA的逆转录反应
2.2.11.2 检测FN1分子的逆转录反应
2.2.13 实时荧光定量核酸扩增反应qPCR
2.2.14 双荧光素酶报告基因实验
2.2.15 细胞增殖实验
2.2.16 流式细胞实验
2.2.16.1 细胞周期实验
2.2.16.2 细胞凋亡实验
2.3 统计学分析
3 结果
3.1 EAE组小鼠发病情况、体征
3.2 EAE组小鼠膀胱肌层胶原纤维及平滑肌形态和数量的变化
3.3 预测可调控FN1合成的miRNA
3.4 多发性硬化模型组小鼠膀胱组织内miR-199a-3p、miR-219c-5p、miR-3572-3p及FN1的表达情况
3.5 原代培养膀胱平滑肌细胞的鉴定
3.6 转染miRNA类似物及拮抗剂转染效率检测
3.7 于膀胱平滑肌细胞内转染miR-219c-5p后对FN1蛋白表达的影响
3.8 双荧光素酶报告基因实验
3.9 细胞增殖实验
3.10 细胞周期实验
3.11 细胞凋亡实验
4 讨论
4.1 多发性硬化患者膀胱功能障碍的临床特点及动物模型
4.2 影响膀胱收缩功能的多种因素
4.3 神经源性膀胱纤维化
4.4 EAE组小鼠膀胱组织FN1和miRNA分子的表达
4.5 miR-219c-5p可靶向调控FN1蛋白的合成
结论
参考文献
综述 多发性硬化致神经源性膀胱纤维化的作用机制研究进展
1 多发性硬化流行病学及诊疗现状
2 神经源性膀胱的流行病学及诊疗现状
3 神经源性膀胱机制研究进展
3.1 PGE2/EP3/EP4信号通路影响膀胱兴奋传导
3.2 Panx1/Cx43通道蛋白介导逼尿肌细胞缝隙连接
3.3 膀胱起搏细胞参与膀胱收缩
4 膀胱纤维化的机制研究
5 miRNA参与纤维化疾病
6. FN1参与纤维化疾病
7. 总结与展望
参考文献
个人简历
致谢
本文编号：3779334
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
1 前言
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 细胞来源
2.1.3 主要试剂
2.1.4 仪器和设备
2.2 方法
2.2.1 建立EAE小鼠模型
2.2.2 HE染色步骤
2.2.3 Masson染色步骤
2.2.4 预测可调控FN1合成的miRNA
2.2.5 膀胱平滑肌细胞鉴定步骤
2.2.6 转染miRNA类似物及拮抗剂
2.2.7 提取膀胱组织蛋白
2.2.8 膀胱平滑肌细胞总蛋白的提取
2.2.9 Western Blot步骤
2.2.10 膀胱组织总RNA的提取
2.2.11 膀胱平滑肌细胞RNA的提取
2.2.12 逆转录-聚合酶链反应RT-PCR
2.2.12.1 检测miRNA的逆转录反应
2.2.11.2 检测FN1分子的逆转录反应
2.2.13 实时荧光定量核酸扩增反应qPCR
2.2.14 双荧光素酶报告基因实验
2.2.15 细胞增殖实验
2.2.16 流式细胞实验
2.2.16.1 细胞周期实验
2.2.16.2 细胞凋亡实验
2.3 统计学分析
3 结果
3.1 EAE组小鼠发病情况、体征
3.2 EAE组小鼠膀胱肌层胶原纤维及平滑肌形态和数量的变化
3.3 预测可调控FN1合成的miRNA
3.4 多发性硬化模型组小鼠膀胱组织内miR-199a-3p、miR-219c-5p、miR-3572-3p及FN1的表达情况
3.5 原代培养膀胱平滑肌细胞的鉴定
3.6 转染miRNA类似物及拮抗剂转染效率检测
3.7 于膀胱平滑肌细胞内转染miR-219c-5p后对FN1蛋白表达的影响
3.8 双荧光素酶报告基因实验
3.9 细胞增殖实验
3.10 细胞周期实验
3.11 细胞凋亡实验
4 讨论
4.1 多发性硬化患者膀胱功能障碍的临床特点及动物模型
4.2 影响膀胱收缩功能的多种因素
4.3 神经源性膀胱纤维化
4.4 EAE组小鼠膀胱组织FN1和miRNA分子的表达
4.5 miR-219c-5p可靶向调控FN1蛋白的合成
结论
参考文献
综述 多发性硬化致神经源性膀胱纤维化的作用机制研究进展
1 多发性硬化流行病学及诊疗现状
2 神经源性膀胱的流行病学及诊疗现状
3 神经源性膀胱机制研究进展
3.1 PGE2/EP3/EP4信号通路影响膀胱兴奋传导
3.2 Panx1/Cx43通道蛋白介导逼尿肌细胞缝隙连接
3.3 膀胱起搏细胞参与膀胱收缩
4 膀胱纤维化的机制研究
5 miRNA参与纤维化疾病
6. FN1参与纤维化疾病
7. 总结与展望
参考文献
个人简历
致谢
本文编号：3779334
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