hsa-miR-655靶向CLCF1基因对人成骨肉瘤MG63细胞OPG/RANKL系统表达的影响

发布时间：2023-04-10 02:31

　　目的探讨hsa-miR-655通过靶向调控心肌营养素样细胞因子1(cardiotrophin-like cytokine factor 1,CLCF1)基因表达,对人成骨肉MG63细胞系增殖、护骨素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)表达的影响。方法通过hsa-miR-655慢病毒转染MG63细胞进行功能获得实验。实验分阴性对照组(NC组)和hsa-miR-655过表达组(OE组),荧光显微镜和流式细胞术(flow cytometry analysis,FCM)评估转染效率,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖能力,FCM检测细胞周期分布,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-miR-655、CLCF1、OPG和RANKL mRNA的水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测CLCF1、OPG及RANKL蛋白的变化。结果荧光显微镜和FCM显示对照组和miR-655过表达组感染效率为80%以上;qRT-PCR结果显示,相对于...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试剂与仪器
    1.2 方法
        1.2.1 MG63细胞培养和慢病毒感染:
        1.2.2 实时荧光定量PCR:
        1.2.3 细胞增殖实验:
        1.2.4 流式细胞术分析细胞周期分布:
        1.2.5 Western blot检测蛋白水平:
        1.2.6 统计学处理:
2 结果
    2.1 hsa-miR-655过表达后上调MG63细胞miR-655水平
    2.2 hsa-miR-655抑制CLCF1基因的表达
    2.3 过表达hsa-miR-655抑制MG63细胞增殖
    2.4 hsa-miR-655抑制MG63细胞周期的进展
    2.5 hsa-miR-655对OPG和RANKL表达的影响
3 讨论



本文编号：3788167