MiR-338-5p通过调节SPRY1促进类风湿性关节炎中成纤维样滑膜细胞的炎症反应

发布时间：2023-05-18 02:45

　　前言:众所周知自身免疫性疾病类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)以滑膜炎作为显著特点。其主要特征包括关节肿胀、软骨破坏、关节僵硬甚至畸形。在发展中国家每10万人中发病人数达到5-50个,而发达国家成人发病率达到0.5%-1%。RA 15岁以下发病少见,但是随着年龄增长到80岁发病率稳步增加。女性患病几率是男性的3-5倍。滑膜成纤维细胞(Synovial Fibroblasts,SFs)又被称为成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like Synoviocytes,FLSs),是关节内滑膜一种特殊细胞类型,在RA的发病过程中起到关键作用。研究报道内源性及外源性因素间的相互作用参与疾病的发展,但microRNAs与其靶基因mRNAs的相互作用仍未完全阐明。MicroRNAs是内生性,长度约20-24个核苷酸的小RNA,在蠕虫和哺乳动物中普遍存在,其功能作为基因表达的负调控对mRNA进行微调,包括分裂、翻译抑制以及失稳。其特殊机制是加载到RNA诱导沉默复合体(RNA inducing silencing Complex,RISC)后miRNAs阻止翻译并通过互...

【文章页数】：84 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
前言
第一部分：利用体外实验检测RA,OA及正常人滑膜细胞中miRNA3385p和SPRY1的表达情况
    1 研究目的
    2 研究资料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 方法
            2.2.1 SFs的提取
            2.2.2 SFs的培养
            2.2.3 实时定量逆转录聚合酶链反应(real time quantitative RT -q PCR)检测SFs细胞中miR3385p及SPRY1 m RNA的表达水平
            2.2.4 Western Blot检测SFs细胞中miR3385p及SPRY1蛋白的表达水平
    3 结果
        3.1 RASFs组织中的miR3385p表达水平明显上调
        3.2 RASFs组织中的SPRY1表达水平明显下调
第二部分：RA滑膜细胞中miRNA3385p与SPRY1相互关系的研究
    1 研究目的
    2 研究资料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 方法
            2.2.1 实验分组
            2.2.2 转染
            2.2.3 双荧光素酶报告基因实验
    3 结果
        3.1 RA组织中miR3385p表达水平与SPRY1表达水平呈负相关
        3.2 SPRY1是miR3385p的靶点
第三部分：miRNA3385p通过靶向调节SPRY1对RASFs细胞的增殖、侵袭和炎症反应的调控作用研究
    1 研究目的
    2 研究资料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 方法
            2.2.1 RASFs的提取
            2.2.2 RASFs的培养
            2.2.3 转染
            2.2.4 设置实验组
            2.2.5 MTT实验
            2.2.6 TRANSWELL细胞体外侵袭实验
            2.2.7 荧光定量RT-PCR
            2.2.8 酶联免疫吸附试验(ELISA)
    3 结果
        3.1 MiR3385p促进RAFLSs的增殖
        3.2 MiR3385p促进RAFLSs的侵袭
        3.3 MiR3385p促进RAFLSs中IL-1α, IL-6 以及COX2蛋白的表达，即促进RAFLSs的炎症反应
第四部分：通过小鼠体内实验研究RA滑膜细胞中miRNA3385p-inhibitor与CORTICOSTERONE对miR3385p和SRRY表达水平的影响
    前言
    1 研究目的
    2 研究资料与方法
        2.0 材料
        2.1 试剂和设备
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 方法
            2.2.1 实验动物
            2.2.2 RA诱导方法
            2.2.3 分组
            2.2.4 提取各组小鼠关节SFs
            2.2.5 RT-PCR测量计算各组SFs内miR3385P和SPRY1m RNA的相对表达水平
            2.2.6 Western Blot检测SFs细胞中SPRY1蛋白的表达水平
    3 结果
        3.1 通过构建小鼠RA模型进行体内实验，研究结果表明通过体表皮下注射miR3385p-inhibitor，RA小鼠滑膜组织中miR3385p表达水平下调，SPRY1的表达水平上调
        3.2 miR3385p-inhibitors同皮质酮一样能够影响滑膜组织中miR3385p和SPRY1的表达水平，可作为抗炎药物使用
讨论
结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
在学期间科研成绩
致谢
个人简介



本文编号：3818513