核心岩藻糖基化调节T-B细胞相互作用机理研究

发布时间：2023-06-02 01:23

　　核心岩藻糖基转移酶(Fut8)是催化N-聚糖核心岩藻糖基化唯一的酶,通过蛋白质翻译后修饰的方式调节蛋白质在机体中的作用。已有研究表明,Fut8在多种自身免疫性疾病中异常表达,在免疫应答方面也发挥着重要作用。CD4⁺T细胞的活化受糖基化调控,参与CD4⁺T细胞活化的大多数分子均为糖蛋白。Fut8通过核心岩藻糖基化影响蛋白质构象、定位及表达。T细胞受体(TCR)是富含核心岩藻糖基的糖蛋白。核心岩藻糖基化通过影响TCR信号转导、细胞因子及其受体的表达进而调节T细胞的活化。适当的糖基化修饰有助于T细胞功能的维持,然而糖基化的紊乱会引起T细胞的异常活化。CD4⁺T细胞过度活化与系统性红斑狼疮(SLE)等自身免疫病的发病密切相关。相关研究已经证明,糖基化以及CD4⁺T细胞活化在自身免疫病的发病中均发挥着重要的作用,但核心岩藻糖基化在CD4⁺T细胞活化以及自身免疫病中的作用尚未完全研究清楚。目的:本研究通过建立Fut8基因敲除小鼠和OT-II转基因小鼠模型,阐明核心岩藻糖基化对CD4

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【学位级别】：硕士

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前言
第一部分 核心岩藻糖基化的增强与SLE发病相关
    (二)材料和方法
        1.实验材料
            1.1 实验对象
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 相关试剂配制
        2.实验方法
            2.1 小鼠基因型鉴定
            2.2 蛋白裂解液制备
            2.3 凝集素印迹
            2.4 蛋白印迹
            2.5 细胞分选
            2.6 流式细胞术
            2.7 Fut8酶活的测定
            2.8 免疫组化
            2.9 EAE模型的建立
    (三)结果
        1.SLE患者血清中核心岩藻糖基水平显著上调
        2.SLE患者外周血CD4⁺T细胞的核心岩藻糖基化水平明显增强
        3.Fut8敲除使脾脏细胞的核心岩藻糖基缺失
        4.核心岩藻糖基的缺失通过降低CD4⁺T细胞活化进而改善EAE症状
    (四)讨论
    (五)结论
第二部分 核心岩藻糖基化通过调控TCR信号转导进而影响CD4⁺T细胞的活化
    (二)材料和方法
        1. 实验材料
            1.1 实验对象
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 相关试剂配制
        2.实验方法
            2.1 动物免疫
            2.2 流式细胞术
            2.3 ELISA
            2.4 免疫沉淀
            2.5 蛋白印迹
            2.6 细胞分选
            2.7 增殖实验
            2.8 共聚焦显微镜
            2.9 基因芯片
    (三)结果
        1.核心岩藻糖基缺失通过影响CD4⁺T细胞活化进而抑制IgG类别转换
        2.核心岩藻糖基化通过调控TCR信号转导进而影响CD4⁺T细胞的活化和增殖
        3. 核心岩藻糖基化缺失影响T-B细胞连接的形成
    (四)讨论
    (五)结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间发表文章情况
致谢



本文编号：3827393