血清来源的外泌体对BEAS-2B细胞气道炎症相关因子表达和TLR4/NF-кB炎症信号通路的影响

发布时间：2023-06-04 21:10

　　背景:支气管哮喘(简称哮喘)是一种作用于呼吸气道的异质性疾病,同时伴有可变的气流受限和气道高反应性,气道炎症贯穿整个疾病的发生发展过程。目前全球患病人数接近3亿,且患病率仍呈现不断上升的趋势,预计到2025年患病人数将达到4亿。随着分子生物学的不断发展,哮喘发病机制的假说也不断更新,目前广泛认为哮喘的发生发展与多种机制相关,主要包括气道变态反应、气道炎症机制、气道神经调节失衡机制及气道重构等,其中气道炎症机制在哮喘的发病过程中扮演着重要的调控作用。有研究表明,哮喘的发生发展与免疫学关键分子、炎症信号通路的传递有着莫大的关联。细胞间的信息传递在人体诸多生理功能的发挥占据重大的作用。近年来,外泌体受到了广泛的关注,是一种能被多种细胞所释放的囊泡状小体,包括蛋白质、脂质、mRNA和miRNA等生物活性物质,可介导细胞间的通讯而参与免疫应答、抗原呈递、炎症反应和细胞迁移等多种病理生理过程。越来越多的证据表明外泌体(exosomes)与哮喘之间有着密切的关联,并认为外泌体有促进哮喘炎症反应的作用。我们在前期的研究结果中发现:哮喘的发生可能与外泌体的释放量增多相关,其可能是导致哮喘气道炎症恶化的关...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 前言
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物与实验细胞
        2.1.2 主要试剂和来源
        2.1.3 主要仪器设备及耗材
        2.1.4 主要试剂及相关液体的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 动物分组
        2.2.2 屋尘螨诱导哮喘豚鼠模型：HDM的致敏和激发
        2.2.3 血清的采取及后续分离操作流程
        2.2.4 BALF中白细胞计数及细胞分类百分比的测定
        2.2.5 肺组织病理学检查
        2.2.6 酶联免疫吸附
        2.2.7 血清外泌体的提取
        2.2.8 TEM观察外泌体的形态特点
        2.2.9 Western Blot检测蛋白的表达
        2.2.10 细胞的培养
        2.2.11 PKH67 染色外泌体和DAPI染色胞核
        2.2.12 P65 免疫荧光染色
        2.2.13 荧光定量 PCR 实验
    2.3 统计学方法
第3章 实验结果
    3.1 两组豚鼠症状观察结果
    3.2 豚鼠肺组织病理学的变化
    3.3 两组豚鼠BALF细胞计数和分类情况
    3.4 两组豚鼠BALF中 IL-4和IL-13 的含量对比
    3.5 豚鼠血清来源的外泌体蛋白浓度比较
    3.6 豚鼠血清来源的外泌体鉴定
    3.7 HDM组血清来源的exosomes进入BEAS-2B细胞的观察情况
    3.8 HDM组血清来源的exosomes对 BEAS-2B细胞炎症因子分泌的影响
    3.9 血清来源的exosomes对 BEAS-2B细胞中TLR4/NF-?B信号通路的分析
    3.10 血清来源的exosomes通过TLR4 信号通路促进细胞因子的表达
    3.11 血清来源的exosomes中 HSP70 通过TLR4 信号通路促进细胞因子的表达
第4章 讨论
第5章 结语
    5.1 结论
    5.2 创新点
    5.3 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3831022