炎症小体及其通路信号因子介导甲状腺免疫微环境稳态失衡诱导自身免疫甲状腺炎：临床和动物研究

发布时间：2023-08-04 20:10

　　目的:自身免疫性甲状腺炎(Autoimmune thyroiditis,AIT)是一种慢性器官特异性自身免疫病,主要由遗传、环境和免疫因素共同作用引起,主要亚型为桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)。HT主要血清学表现为甲状腺自身抗体(TPOAb/TgAb)水平增高,病理特征为甲状腺组织中淋巴细胞浸润伴有滤泡结构破坏。甲状腺组织内细胞种类繁多,存在免疫细胞稳态失衡,然而具体发病机制尚不明确。因此我们利用10X Genomics单细胞测序技术在单个细胞水平进行高通量转录组测序探索HT患者甲状腺组织免疫微环境,并依据单个细胞所表达的特异性标志基因进行细胞分群,并进一步比较HT患者与对照者之间基因各个亚群基因表达差异以及各个亚群之间细胞信号交流。NOD.H-2^h4小鼠是自发性自身免疫性甲状腺炎(Spontaneous autoimmune thyroiditis,SAT)经典的动物模型,高碘喂养情况下,小鼠甲状腺组织免疫病理类型与桥本甲状腺炎相似,并伴血清中抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)滴度升高。炎症小体(Inflammasomes)是一...

【文章页数】：108 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :自身免疫甲状腺炎患者甲状腺组织10X Genomics单细胞测序
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 临床研究对象的确定
            2.2.2 人甲状腺组织单细胞悬液的制备
            2.2.3 10X Genomics上机操作及反转录制备c DNA
    3 结果
        3.1 研究对象基本情况
        3.2 测序结果
            3.2.1 建库前样本质量检测
            3.2.2 细胞鉴定及基因表达定量
            3.2.3 细胞群体分析
            3.2.4 以Con组作为对照组,HT组作为实验组进行组间比较分析
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :炎症小体及其通路信号分子在SAT动物模型中的表达及其在AIT发生发展中的作用
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要实验试剂与仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 试验方法
            2.2.1 试验动物以及分组
            2.2.2 麻醉并留取小鼠组织
            2.2.3 小鼠甲状腺组织冰冻切片HE染色及炎性评分
            2.2.4 ELISA法检测小鼠血清Tg Ab滴度
            2.2.5 小鼠甲状腺组织q-PCR分析
            2.2.6 流式细胞术检测小鼠脾脏Th1/Th17/Tfh/Tfr亚群比例
    3 结果
        3.1 不同实验时点NOD.H-2^h4小鼠甲状腺相对重量变化
        3.2 不同实验时点NOD.H-2^h4小鼠血清Tg Ab水平变化
        3.3 不同实验时点NOD.H-2^h4小鼠甲状腺组织炎性评分
        3.4 不同实验时点NOD.H-2^h4小鼠甲状腺炎症小体及其通路信号因子mRNA表达变化
        3.5 不同实验时点NOD.H-2^h4小鼠脾脏Th1/Th17/Tfh/Tfr亚群比例表达变化
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :阻断或敲除炎症小体NLRP3对自身免疫甲状腺炎影响的动物实验研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要实验试剂与仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 试验动物
            2.2.2 构建NOD.H-2^h4背景的NLRP3小鼠
            2.2.3 试验动物分组
            2.2.4 小鼠甲状腺HE染色炎症形态学评估
            2.2.5 ELISA法检测小鼠血清Tg Ab滴度
            2.2.6 流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞Th1/Th17比例
    3 结果
        3.1 NLRP3特异性阻断剂MCC950干预后
            3.1.1 阻断干预后NOD.H-2^h4小鼠甲状腺相对重量
            3.1.2 阻断干预后NOD.H-2^h4小鼠血清Tg Ab水平
            3.1.3 阻断干预后NOD.H-2^h4小鼠甲状腺组织形态学改变
            3.1.4 阻断干预后NOD.H-2^h4小鼠脾脏Th1/Th17细胞亚群比例表达变化
            3.1.5 阻断干预后NOD.H-2^h4小鼠脾脏Tfh/Tfr细胞亚群所占比例
        3.2 NLRP3敲除小鼠
            3.2.1 基因敲除后NOD.H-2^h4小鼠甲状腺相对重量
            3.2.2 基因敲除后NOD.H-2^h4小鼠血清Tg Ab水平
            3.2.3 基因敲除后NOD.H-2^h4小鼠甲状腺组织形态学改变
    4 讨论
    5 结论
创新性自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3838919