沙格列汀通过CaMKKβ/AMPK干预糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病模型的研究

发布时间：2023-10-27 17:46

　　目的:非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是代谢性疾病累及肝脏的主要病症,是2型糖尿病的重要合并症。炎症、免疫、胰岛素抵抗、氧化应激、凋亡及内质网应激等多种机制均参与到NAFLD发展之中。其中,炎症在NAFLD发生和进展中发挥重要作用,并且NAFLD的病理表现与肝脏巨噬细胞沉积及极化有密切关系。DPP-4抑制剂,作为临床已广泛应用的新型降糖药物,通过促进肠促胰素的产生而促进胰岛素分泌,发挥葡萄糖依赖的降糖效果。近来研究,二肽基肽酶-4(DPP-4)是介导免疫和炎症反应的关键因子,故有研究表明DPP-4抑制剂还可能通过其他作用机制发挥胰腺外治疗作用。目前,DPP-4抑制剂对NAFLD作用报道很少且作用机制尚未完全阐述清楚,而沙格列汀作为DPP-4抑制剂家族的一种,在NAFLD中的作用机制尚未涉足。因此,基于DPP-4的炎症介导作用,我们通过构建动物模型、培养细胞进行体内外实验、应用多种实验技术,研究沙格列汀是否通过抑制肝脏炎症反应而起到改善NAFLD作用。并且探讨沙格列汀是否通过影响肝脏巨噬细胞的沉积及极化来起到抗炎作用。此外,我们进一步研究沙格列汀通过何种信号通路调控巨噬细胞极化并影响肝脏...

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、沙格列汀干预2型糖尿病大鼠合并NAFLD模型
    1.1 对象及方法
        1.1.1 实验动物及饲料
        1.1.2 实验动物饲养
        1.1.3 主要试剂和仪器
        1.1.4 构建2型糖尿病大鼠模型
        1.1.5 一般指标及生化检查
        1.1.6 大鼠肝组织形态学观察
        1.1.7 大鼠肝组织甘油三酯含量测定
        1.1.8 大鼠肝组织总胆固醇含量测定
        1.1.9 大鼠肝组织DPP-4酶活性检测
        1.1.10 免疫组化法检测大鼠肝组织NF-кB、TNF-α、IL-1β的表达
        1.1.11 免疫荧光法检测大鼠肝组织CD68、iNOS、CD206的表达
        1.1.12 qRT-PCR检测肝组织NF-кB、TNF-α、IL-1β mRNA表达
        1.1.13 Western Blotting检测肝组织DPP-4、NF-кB、TNF-α、IL-1β、IL-6、CD68、iNOS、CD206、CaMKKβ、p-AMPK蛋白表达
        1.1.14 统计学方法
    1.2 结果
        1.2.1 高脂饮食10周末大鼠体重、血糖及血脂情况
        1.2.2 IPGTT及AUC评价高脂喂养10周末大鼠糖耐量水平
        1.2.3 灌胃12周末大鼠一般情况、血糖、生化指标检测
        1.2.4 大鼠肝组织形态学观察
        1.2.5 大鼠肝组织甘油三酯及总胆固醇含量测定
        1.2.6 大鼠肝组织DPP-4酶活性及蛋白水平表达
        1.2.7 大鼠肝组织炎症因子NF-кB、TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平
        1.2.8 大鼠肝组织巨噬细胞浸润水平及巨噬细胞表型差异
        1.2.9 Western Blotting检测肝组织CaMKKβ、p-AMPK蛋白表达
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、沙格列汀对巨噬细胞极化的影响
    2.1 对象与方法
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 主要试剂和仪器
        2.1.3 细胞培养
        2.1.4 细胞分化诱导及药物干预
        2.1.5 免疫荧光法检测M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞表型
        2.1.6 Western Blotting检测p-AMPK、NF-кB、TNF-α、CD206蛋白表达
        2.1.7 统计学方法
    2.2 结果
        2.2.1 佛波酯(PMA)诱导分化THP-1单核细胞形态特点
        2.2.2 免疫荧光染色技术M1和M2型巨噬细胞鉴定
        2.2.3 Western Blotting检测p-AMPK、NF-кB、TNF-α和CD206蛋白表达
    2.3 讨论
    2.4 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 免疫炎症与非酒精性脂肪性肝病
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3856979