TLR4及ROS在oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC凋亡中的作用探讨
发布时间：2023-11-05 09:09
研究目的:β2糖蛋白I(β-2-glycoprotein I,β2GPI)是抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome,APS)患者体中的自身抗原,针对该抗原的自身抗体抗β2GPI抗体(anti-β2GPI antibody,aβ2GPI)能够通过TLR4依赖的方式参与APS的致病过程。APS患者有加速发展为动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的倾向,氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox LDL)作为AS的独立危险因子,可以和β2GPI形成致AS的复合物ox LDL/β2GPI,对细胞有氧化与促进脂质积累的功能,ox LDL/β2GPI同时也能和β2GPI的抗体aβ2GPI形成ox LDL/β2GPI/aβ2GPI的复合物参与AS相关病理改变。本组前期实验表明,ox LDL/β2GPI/aβ2GPI能够促进一系列动脉硬化相关因子活化,而内皮细胞的功能障碍作为AS的始发因素,ox LDL/β2GPI/aβ2GPI对内皮细胞的损伤却尚未明确,所以本实验在相关文献和前期研究基础上旨在探讨ox LDL/...
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要英文缩略词索引
第一章 绪论
1.1 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物与AS
1.1.1 APS与AS
1.1.2 β2GPI与aβ2GPI
1.1.3 血管内皮细胞与APS、AS
1.1.4 oxLDL/β2GPI复合物
1.1.5 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物与AS
1.2 TLR4/MyD88/IRAK信号通路
1.2.1 TLRs的概况及TLR4配体
1.2.2 TLR4信号通路
1.2.3 TLR4/MyD88/IRAK信号通路与AS
1.3 氧化应激
1.3.1 氧化应激及其信号分子
1.3.2 氧化应激与AS
1.4 凋亡
1.4.1 凋亡信号通路及其常见标志物
1.4.2 凋亡与炎症因子、氧化应激
1.4.3 凋亡与AS
1.5 结语
第二章 研究内容、方案设计与研究意义
2.1 研究内容
2.2 方案设计
2.2.1 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC凋亡及TLR2、TLR4、MyD88、IRAK4的表达
2.2.2 TLR4、IRAK1/4抑制剂对oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC凋亡的影响
2.2.3 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC氧化应激
2.2.4 抗氧化剂对oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC ROS升高的影响
2.2.5 抗氧化剂对oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC凋亡的影响
2.3 研究意义
第三章 材料与方法
3.1 材料
3.1.1 主要试剂
3.1.2 其他试剂
3.1.3 主要溶液的配制
3.1.4 主要仪器
3.2 方法
3.2.1 人血浆β2GPI的提取、纯化与鉴定
3.2.2 兔抗人β2GPI多克隆抗体的制备与鉴定
3.2.3 HUVEC的复苏、培养、传代、冻存与铺板
3.2.4 实验分组与剂量
3.2.5 细胞总蛋白的提取及Western蛋白印迹
3.2.6 细胞总RNA的提取、逆转录和RT-qPCR分析
3.2.7 Annexin V-FITC/PI双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡水平
3.2.8 CCK-8法法检测细胞活力
3.2.9 DCFH-DA检测细胞活性氧
3.2.10 BCA测定蛋白浓度
3.2.11 总SOD试剂盒检测细胞细胞超氧化物歧化酶活性(WST-8法)
3.2.12 MDA试剂盒检测细胞内脂质氧化
3.2.13 图像采集与统计学分析
第四章 结果
4.1 β2GPI与aβ2GPI的提取及鉴定
4.2 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC凋亡
4.3 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物促进HUVEC TLR4、TLR2、MyD88、IRAK4的表达
4.4 TLR4、IRAK1/4抑制剂减少oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导的HUVEC凋亡
4.5 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物促进HUVEC ROS、MDA表达,减少SOD表达,减弱细胞活力
4.6 抗氧化剂处理减少oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物引起的HUVEC ROS升高,恢复部分细胞活力
4.7 抗氧化剂处理减少oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导的HUVEC凋亡
4.8 讨论
第五章 主要结论及展望
5.1 主要结论
5.2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的文章与参加的会议
一、攻读硕士学位期间发表的文章
二、攻读硕士学位期间参加的学术会议
本文编号：3860734
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【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要英文缩略词索引
第一章 绪论
1.1 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物与AS
1.1.1 APS与AS
1.1.2 β2GPI与aβ2GPI
1.1.3 血管内皮细胞与APS、AS
1.1.4 oxLDL/β2GPI复合物
1.1.5 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物与AS
1.2 TLR4/MyD88/IRAK信号通路
1.2.1 TLRs的概况及TLR4配体
1.2.2 TLR4信号通路
1.2.3 TLR4/MyD88/IRAK信号通路与AS
1.3 氧化应激
1.3.1 氧化应激及其信号分子
1.3.2 氧化应激与AS
1.4 凋亡
1.4.1 凋亡信号通路及其常见标志物
1.4.2 凋亡与炎症因子、氧化应激
1.4.3 凋亡与AS
1.5 结语
第二章 研究内容、方案设计与研究意义
2.1 研究内容
2.2 方案设计
2.2.1 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC凋亡及TLR2、TLR4、MyD88、IRAK4的表达
2.2.2 TLR4、IRAK1/4抑制剂对oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC凋亡的影响
2.2.3 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC氧化应激
2.2.4 抗氧化剂对oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC ROS升高的影响
2.2.5 抗氧化剂对oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC凋亡的影响
2.3 研究意义
第三章 材料与方法
3.1 材料
3.1.1 主要试剂
3.1.2 其他试剂
3.1.3 主要溶液的配制
3.1.4 主要仪器
3.2 方法
3.2.1 人血浆β2GPI的提取、纯化与鉴定
3.2.2 兔抗人β2GPI多克隆抗体的制备与鉴定
3.2.3 HUVEC的复苏、培养、传代、冻存与铺板
3.2.4 实验分组与剂量
3.2.5 细胞总蛋白的提取及Western蛋白印迹
3.2.6 细胞总RNA的提取、逆转录和RT-qPCR分析
3.2.7 Annexin V-FITC/PI双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡水平
3.2.8 CCK-8法法检测细胞活力
3.2.9 DCFH-DA检测细胞活性氧
3.2.10 BCA测定蛋白浓度
3.2.11 总SOD试剂盒检测细胞细胞超氧化物歧化酶活性(WST-8法)
3.2.12 MDA试剂盒检测细胞内脂质氧化
3.2.13 图像采集与统计学分析
第四章 结果
4.1 β2GPI与aβ2GPI的提取及鉴定
4.2 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导HUVEC凋亡
4.3 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物促进HUVEC TLR4、TLR2、MyD88、IRAK4的表达
4.4 TLR4、IRAK1/4抑制剂减少oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导的HUVEC凋亡
4.5 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物促进HUVEC ROS、MDA表达,减少SOD表达,减弱细胞活力
4.6 抗氧化剂处理减少oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物引起的HUVEC ROS升高,恢复部分细胞活力
4.7 抗氧化剂处理减少oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导的HUVEC凋亡
4.8 讨论
第五章 主要结论及展望
5.1 主要结论
5.2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的文章与参加的会议
一、攻读硕士学位期间发表的文章
二、攻读硕士学位期间参加的学术会议
本文编号：3860734
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