氟通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制ATDC5细胞增殖和分化

发布时间：2024-03-20 23:16

　　目的:氟是一种人体必需微量元素,适量氟能够维持机体正常生理功能,过量氟则会引起氟中毒。流行病学调查显示,高氟地区儿童骨龄延迟,身高、体重、胸围均低于正常同龄儿童。本课题组前期动物实验和器官培养实验发现氟通过抑制软骨内成骨过程损害长骨纵向生长。软骨内成骨是骨形成的主要方式,此过程受到全身激素、细胞因子和局部产生的信号因子共同作用。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种广泛存在于生物细胞中的丝氨酸/苏氨酸激酶,是细胞生长、增殖、分化、存活和自噬的中心调控因子。然而,氟是否通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制软骨内成骨尚未见报道。为此,我们通过体外器官培养胚胎大鼠胫骨和体外培养源于畸胎瘤细胞的小鼠软骨发生细胞ATDC5细胞模拟软骨细胞分化,观察氟是否通过调控PI3K/AKT/m TOR信号通路抑制软骨细胞的增殖和分化。本研究为阐明氟抑制长骨生长的机制提供线索,为氟骨症的防治提供依据。实验方法:本研究选取胚胎第20天的胎鼠胫骨,采用左右配对的方法分为两组,左侧胫骨为对照组,右侧胫骨为染氟组(10-4M NaF),培养于含0.2...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1大鼠胫骨软骨细胞中PCNA和p-S6免疫组化结果

中国医科大学硕士学位论文103结果3.1氟抑制胫骨软骨细胞增殖和mTOR的活性3.1.1氟对胫骨软骨细胞增殖的影响免疫组化实验结果显示，对照组胫骨PCNA蛋白主要表达于软骨细胞核内，呈棕黄色（图1A）。染氟组胫骨PCNA阳性的软骨细胞数目较对照组减少、染色较浅。定量结果显示染氟组....

图2CCK8法测定ATDC5细胞活力（n=6）

中国医科大学硕士学位论文113.2氟对小鼠ATDC5细胞活力及形态影响3.2.1氟对ATDC5细胞活力的影响采用CCK8法检测氟对ATDC5细胞活力的影响。如图2所示，10-7M染氟组细胞活力高于对照组，但差异无统计学意义。10-5M时，细胞活力开始下降，随着染氟剂量增加，细胞活....

图3ATDC5细胞的形态学观察（n=3）

中国医科大学硕士学位论文12图3ATDC5细胞的形态学观察（n=3）3.3氟对小鼠ATDC5细胞分化的影响。3.3.1ITS诱导ATDC5细胞分化ATDC5细胞保持着软骨祖细胞原有的特性，在含有胰岛素-转铁蛋白-硒（ITS）的DMEM培养基中可分化。如图4所示，培养第5天，细胞快....

图4分化的ATDC5细胞的形态学观察（n=3）

中国医科大学硕士学位论文13图4分化的ATDC5细胞的形态学观察（n=3）3.3.2氟对ATDC5细胞分化过程中蛋白多糖合成的影响阿利新蓝染色实验检测ATDC5细胞蛋白多糖的合成情况并观察软骨结节的形成数量。如图5所示，阿利新蓝染色后蛋白多糖呈蓝染。对照组细胞染色强度随培养时间增....

本文编号：3933450