GLP-1对高脂环境胰岛β细胞的保护作用及机制的初步探究

发布时间：2024-03-22 03:35

　　目的:观察胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)类似物利拉鲁肽(liraglutide)对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的小鼠胰岛β细胞株Min6损伤的保护作用,并初步探讨利拉鲁肽对Min6细胞的保护作用与自噬的关系。方法:选用小鼠胰岛β细胞Min6作为研究对象,采用棕榈酸诱导建立胰岛β细胞损伤模型,将对数生长期的Min6细胞随机分为对照组:用普通培养基培养24h;棕榈酸组:用0.5mmol/L PA培养24h;利拉鲁肽+棕榈酸组:先加入100nmol/L利拉鲁肽预培养2h,再与0.5mmol/L PA共同干预24h;利拉鲁肽+棕榈酸+雷帕霉素(Rapamycin,RAP)组:先以50nmol/L Rapamycin预培养2h,再与0.5mmol/L PA+100nmol/L利拉鲁肽共同培养24h。干预结束后通过CCK8法检测细胞的生长活力;流式细胞术检测Min6细胞的凋亡情况;活性氧试剂盒检测细胞内ROS的水平;RT-PCR技术测定Min6细胞自噬相关基因beclin-1mRNA及LC3-ⅡmRNA的表达水平;DAPI染色观察...

【文章页数】：38 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 前言
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要实验仪器和设备
    2.2 实验用溶液的配制
        2.2.1 Min6细胞完全培养基的配制
        2.2.2 Min6细胞冻存液的配制
        2.2.3 棕榈酸溶液的配制
        2.2.4 利拉鲁肽溶液的配制
        2.2.5 雷帕霉素溶液的配制
    2.3 实验步骤及过程
        2.3.1 细胞培养及分组
        2.3.2 CCK-8法检测棕榈酸、利拉鲁肽对Min6细胞增殖活力的影响
        2.3.3 CCK-8法检测利拉鲁肽对棕榈酸作用下Min6细胞增殖活力的影响并确定利拉鲁肽的干预浓度
        2.3.4 Min6细胞内ROS水平的检测
        2.3.5 AnnexinV-FITC/PI双染法检测Min6细胞的凋亡率
        2.3.6 RT-PCR检测Min6细胞自噬相关基因的表达
        2.3.7 DAPI染色检测棕榈酸对Min6细胞形态的影响
        2.3.8 数据统计
第三章 结果
    3.1 棕榈酸抑制Min6细胞的增殖
    3.2 利拉鲁肽对Min6细胞增殖活力的影响
    3.3 利拉鲁肽对棕榈酸诱导的Min6细胞损伤的影响
    3.4 利拉鲁肽抑制棕榈酸诱导的Min6细胞氧化应激反应
    3.5 利拉鲁肽对棕榈酸诱导的Min6细胞凋亡的影响
    3.6 利拉鲁肽对Min6细胞内自噬相关基因beclin-1、LC3-Ⅱ mRNA的影响
    3.7 DAPI染色检测棕榈酸对Min6细胞形态的影响
第四章 讨论
    4.1 GLP-1对高脂环境胰岛β细胞的保护作用及机制的初步探究
    4.2 创新性与不足
第五章 结论
参考文献
综述
    参考文献
在学期间研究成果
致谢



本文编号：3934575