Nur77通过活化p38MAPK增加脂毒性状态下小鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运

发布时间：2024-04-20 06:59

　　目的:糖尿病已成为严重威胁人类健康的慢性疾病之一。胰岛素抵抗是2型糖尿病的主要特征,而骨骼肌中的胰岛素抵抗已成为许多研究和评论的焦点。孤儿核受体Nur77是核受体超家族中的一员,也是糖代谢过程中的关键调节蛋白,在糖代谢过程中发挥着重要的调控作用。而p38MAPK是MAPK家族的重要成员,在各种细胞外刺激下被激活,参与炎症过程,细胞生长和分化,细胞周期和细胞死亡,同时许多研究发现活化的p38 MAPK可以增加GLUT4介导的葡萄糖转运。因此本研究应用C2C12肌管为实验对象,研究在脂毒性状态下Nur77与p38MAPK之间是否存在相互作用进而影响GLU4介导的葡萄糖转运。方法:棕榈酸处理C2C12肌管造成胰岛素抵抗模型,检测脂毒性状态下细胞葡萄糖摄取水平、24h葡萄糖消耗水平以及Nur77、GLUT4总蛋白水平和GLUT4膜蛋白水平。构建过表达Nur77慢病毒和敲低Nur77慢病毒,分别感染C2C12肌管,检测细胞葡萄糖摄取水平、24h葡萄糖消耗水平以及GLUT4总蛋白和膜蛋白水平。在胰岛素抵抗模型基础上,过表达Nur77并给予p38MAPK特异性抑制剂SB203580,检测细胞葡萄糖摄...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.2四种质粒共同转染293T细胞

中国医科大学硕士学位论文图1.1构建过表达Nur77质粒A：带BspeI酶切位点的Nur77CDS序列行琼脂糖凝胶电泳（1.8kb）；B：BspeI限制性内切酶分别单酶切RpLenti-GFP和Nur77CDS序列后行琼脂糖凝胶电泳(7.5kb和1....

图1.3qPCR测定慢病毒浓度A:各样品CT值及浓度；B:标准曲线

图1.3qPCR测定慢病毒浓度A:各样品CT值及浓度；B:标准曲线。3.1.4检测慢病毒感染效率慢病毒感染293T细胞48h后，观察荧光，对照（CON）慢病毒感染效率可达到80%左右，过表达Nur77慢病毒感染效率可达到60%左右（图1.4，A）。7....

图1.4检测慢病毒感染效果

图1.4检测慢病毒感染效果A:慢病毒感染目的细胞48h后荧光;B:慢病毒感染目的细胞72h后RNA水平;C:慢病毒感染目的细胞72h后蛋白水平。各实验均独立重复三次，***代表P<0.0013.2构建敲低Nur77慢病毒3.2.1构建重组shRNA....

图2.2鉴定重组shRNA质粒敲低效果

图2.1构建重组敲低Nur77质粒A:AgeI和EcoRI双酶切鉴定质粒（7kb和1.9kb）;B:限制性内切酶EcoRI单酶切重组shRNA-Nur77质粒后行琼脂糖凝胶电泳（7kb）;C:限制性内切酶EcoRI和NcoI双酶切重组shRNA-N....

本文编号：3959048