TGF-β/AMPK通路介导马凡综合征患者血管祖细胞早衰的机制研究

发布时间：2024-06-01 12:05

　　目的:马凡综合征心血管病变是导致患者死亡的主要原因,而存在于主动脉血管壁外膜的血管祖细胞在血管损伤后的修复中发挥着重要作用,因此本研究旨在探讨TGF-β介导的马凡综合征血管祖细胞早衰机制,揭示马凡综合征患者血管稳态降低的原因,为临床早期干预马凡综合征主动脉病变提供新的靶点和理论依据。方法:分别选取器官捐献供体以及行主动脉手术的马凡综合征患者主动脉组织,原代培养及免疫磁珠法筛选出c-kit⁺血管祖细胞。运用Ki67增殖实验、Transwell迁移实验、SA-β-gal染色检测两组血管祖细胞的增殖、迁移能力以及衰老程度。并运用RNA测序方法比较两组细胞差异表达的基因,进行功能富集分析。对正常供体血管祖细胞予以TGF-β1(50ng/ml)干预48h,马凡综合征血管祖细胞予以TGF-β1-siRNA沉默TGF-β的表达,检测两种细胞的衰老情况,探讨TGF-β在血管壁干细胞衰老中的作用。在正常细胞培养基中分别加入TGF-β1和TGFβ1+Mito-Tempo,马凡细胞中加入Mito-Tempo(10uM)干预48h,探讨Mito-SOX在细胞衰老中的作用。在正常血管祖细胞...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1人血管祖细胞的分离与培养示意图

的培养箱中，每隔3天更换培养基。血管祖细胞分离培养流程如图2-1。图2-1人血管祖细胞的分离与培养示意图Figure2-1TheschematicdiagramofhumanVPCsisolationandculture.2.3.4主动脉组织切片c....

图2-2主动脉组织H&E和Masson染色Figure2-2TheH&EandMassonstainingoftheaortic注：H&E染色中红色为细胞质，蓝色为细胞核；Masson染色中红色为肌纤维、胞浆，蓝绿色为胶

BMI:身高体重指数；BSA:体表面积；Control：器官捐献供体组；MFS:马凡综合征组。2.4.2马凡综合征患者主动脉中膜囊性变、结构破坏图2-2主动脉组织H&E和Masson染色Figure2-2TheH&EandMassonstainingo....

图2-3主动脉组织外膜c-kit免疫荧光染色Figure2-3Theimmunofluorescencestainingofc-kitintheadventitiaoftheaortic注：A图中红色代表c-kit蛋白，蓝色代表细胞核，Adv代表血管壁外膜，Control代表供体，MFS

的血管祖细胞存在（图2-3A），而且与正常供体组相比，马凡综合征的VPCs数量减少（图2-3B）。图2-3主动脉组织外膜c-kit免疫荧光染色Figure2-3Theimmunofluorescencestainingofc-kitintheadven....

图2-4表面标志物的流式细胞术鉴定Figure2-4Surfacemarkerprofilingdeterminedbyfluorescenc-eactivatedcellsorting(FACS)

也表达血管祖细胞标志物c-kit，而不表达白细胞（CD34）和内皮细胞（CD31）标志物（图2-4）。图2-4表面标志物的流式细胞术鉴定Figure2-4Surfacemarkerprofilingdeterminedbyfluorescenc-eactiva....

本文编号：3985865