骨髓间充质干细胞外泌源性miRNA-144-5p调控PTEN治疗卵巢早衰

发布时间：2024-06-02 01:44

　　目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)及其源性外泌体(exosome,EXO)对化疗性卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)的修复作用及机制。方法体外分离、培养和鉴定BMSCs,提取并鉴定BMSCs源性EXO。建立POF大鼠模型,BMSCs及其源性EXO移植治疗POF大鼠,通过(1)评估大鼠一般情况:体重、精神、毛发、进食及二便;(2)采用阴道涂片检测动情周期;(3)ELISA检测血清激素;(4)HE染色进行卵巢卵泡计数;(5)Tunnel及免疫组化检测组织凋亡及调亡蛋白表达来评估BMSCs及其源性EXO对早衰模型大鼠的卵巢修复作用。体外分离、培养并鉴定大鼠卵巢颗粒细胞(GCs),建立体外POF模型(CTXGCs),建立CTX-GCs与BMSCs及其源性EXO的共培养体系,AnnexinV/PI检测共培养处理后CTX-GCs的细胞凋亡;观察CTX-GCs对BMSCs源性EXO的摄取及miR-144-5p表达;改变共培养体系中BMSCs源性EXO中miR-144-5p水平,检测CTX-G...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
主要缩略词表
第一章 引言
    1.1 卵巢早衰概述
    1.2 间充质干细胞概述
    1.3 外泌体概述
    1.4 miRNA概述
    1.5 技术路线
第二章 BMSCs及其源性外泌体对POF的治疗作用
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 实验耗材
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 实验动物
    2.2 实验方法
        2.2.1 BMSCs分离、培养与鉴定
        2.2.2 BMSCs源性外泌体提取与鉴定
        2.2.3 POF体内大鼠模型的建立
        2.2.4 BMSCs及外泌体移植
        2.2.5 大鼠发情周期检测
        2.2.6 ELISA实验检测大鼠血清激素水平
        2.2.7 卵巢形态和卵泡计数
        2.2.8 Tunnel法测组织凋亡
        2.2.9 免疫组化实验检测卵巢组织中Caspase3、Caspase9 的表达
        2.2.10 大鼠GCs的体外分离、培养及鉴定
        2.2.11 POF体外细胞模型的建立
        2.2.12 CTX-GCs与 BMSCs共培养
        2.2.13 外泌体标记,追踪实验
        2.2.14 Annexin V-FITC法检测细胞凋亡
        2.2.15 统计学分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 BMSCs及其外泌体鉴定
        2.3.2 POF体内大鼠模型的鉴定
        2.3.3 BMSCs及其外泌体对POF大鼠卵巢功能的修复作用
        2.3.4 POF 体外细胞模型鉴定
        2.3.5 BMSCs及其外泌体对CTX-GCs凋亡的调节作用
    2.4 讨论
第三章 BMSCs源性外泌体修复POF的机制
    3.1 实验材料
        3.1.1 主要仪器
        3.1.2 实验耗材
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 实验动物
    3.2 实验方法
        3.2.1 miRNA表达水平检测
        3.2.2 免疫组化检测卵巢组织中PTEN的表达
        3.2.3 Western Blot实验
        3.2.4 miR-144-5p模拟物或抑制物转染BMSCs及其外泌体
        3.2.5 CTX-GCs与转染miRNA模拟物或抑制物的BMSCs源外泌体共培养
        3.2.6 AnnexinV/PI法检测细胞凋亡
    3.3 实验结果
        3.3.1 BMSC及其源性EXO对 POF体内外模型中miRNA-144-5p表达水平的影响
        3.3.2 BMSC及其源性EXO对 POF体内外模型中PTEN表达水平的影响
        3.3.3 BMSCs外泌体对PTEN/PI3K/AKT通路的调控
    3.4 讨论
第四章 结论和展望
    4.1 主要结论
    4.2 工作展望
参考文献
攻读硕士期间发表论文和参与课题情况
致谢



本文编号：3986668