miR-149-5p在脂质代谢中的作用

发布时间：2024-06-06 01:03

　　背景miRNA是一类内源性、序列高度保守、长约22个核苷酸的单链非编码小RNA,在转录后水平对靶基因表达进行调控。miRNAs参与了生物体诸多生理和病理过程。脂质代谢紊乱是动脉粥样硬化、肥胖、脂肪肝等代谢性疾病发生的病理基础,迫切需要阐明其发生机制,开发新的调节脂代谢的药物。虽然已有报道miRNA通过多种途径调控脂质代谢从而影响动脉粥样硬化的发展进程,然而miR-149-5p在脂质代谢中的作用机制研究仍未见报道。本研究中我们将初步探索miR-149-5p在脂质代谢中的作用及机制。目的探究miR-149-5p在脂质代谢中的生物学效应及其作用机制。方法1.高脂血症小鼠模型肝脏组织中miR-149-5p的定量检测。选取8周龄C57BL/6小鼠及LDLR^-/-小鼠:C57BL/6小鼠分别使用普通饲养和高脂饲料饲养,LDLR^-/-小鼠使用普通饲料饲养。15周后处死小鼠取肝脏组织提取miRNA,使用TaqMan~?MicroRNA Assays定量检测miR-149-5p,并检测各小鼠血清总胆固醇和甘油三酯含量,分析miR-149-5p表达与血清总胆固醇...

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
引言
1.实验材料、试剂与仪器
    1.1 实验材料
    1.2 实验试剂
    1.3 溶液配制
    1.4 实验仪器
2.实验方法
    2.1 双荧光素酶载体构建
    2.2 细胞培养
    2.3 转染
    2.4 pmir-GLO载体双荧光素酶报告分析
    2.5 mirVana^TM miRNA Isolation Kit提取miRNA
    2.6 miRNA的反转录与定量检测
    2.7 细胞总mRNA的提取
    2.8 总mRNA反转录
    2.9 Real-Time PCR
    2.10 细胞内总蛋白提取
    2.11 蛋白浓度测定
    2.12 Western Blot 实验
    2.13 腺病毒扩增
    2.14 腺病毒提取
    2.15 腺病毒纯化
    2.16 腺病毒滴度测定
    2.17 小鼠腺病毒注射
    2.18 THP-1 胆固醇外流实验
    2.19 免疫组织化学染色
    2.20 HE染色
    2.21 统计学方法
3.实验结果
    3.1 miR-149-5p在高脂血症小鼠肝脏中的表达
    3.2 miR-149-5p的生物信息学预测分析结果
    3.3 miR-149-5p Agomir转染剂量的选择
    3.4 miR-149-5p预测靶基因的荧光素酶报告分析
    3.5 miR-149-5p在 HepG2 细胞中的作用
    3.6 miR-149-5p在 THP-1 细胞中的作用
    3.7 miR-149-5p在小鼠体内的影响
4 讨论
5 结论
参考文献
综述 MircroRNA对脂质代谢的调控
    参考文献
致谢



本文编号：3990070