Fas/FasL凋亡途径在氟致PC12细胞损伤中的作用及L-型钙通道拮抗剂的影响

发布时间：2024-06-08 02:58

　　氟是与人体健康密切相关的微量元素之一,适量摄入有益于机体的生长发育及维持骨骼、牙齿的正常结构和生理机能;一旦被过量摄入,就会通过血液循环进入全身各处,并在体内蓄积,引起机体急性或慢性氟中毒效应,称为地方性氟中毒,简称地氟病。地氟病致病机制复杂,涉及氧化应激、线粒体改变、内质网应激、信号转导通路改变等。研究表明,氟暴露致细胞凋亡异常可能也是氟致细胞损伤的机制之一。细胞凋亡是一种由基因调控的程序性死亡,真核细胞主要通过内部线粒体途径、内质网途径和外部死亡受体途径介导细胞凋亡发生。我们前期的研究提示,内质网和线粒体途径参与了氟暴露致细胞凋亡异常,但氟暴露致细胞凋亡的死亡受体途径鲜见报道,Fas/Fas L信号通路是主要死亡受体通路之一,在细胞凋亡过程中起重要作用。且在许多细胞凋亡进程中,常伴随Ca2+浓度异常增加,特别是在凋亡早期,细胞内Ca2+浓度异常升高,提示Ca2+可能是启动细胞凋亡的早期信号之一。而在对氟中毒动物模型和体外细胞毒性试验中均检测到细胞内钙离子超载的现象,并证实其与活性氧水平升高以及细胞凋亡密切相关。前期在体动物神经电生理研究表明,细胞内钙超载可能是氟暴露后细胞膜上L-型...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 绪论
    1 氟化物毒性作用的研究现状
        1.1 氟对骨项器官的毒性作用
        1.2 氟对非骨项器官的毒性作用
    2 氟诱导细胞凋亡机制的研究进展
        2.1 线粒体介导氟诱导细胞凋亡的途径
        2.2 内质网应激介导氟诱导细胞凋亡的途径
        2.3 死亡受体介导的氟诱导细胞凋亡途径
    3 抗氟药物研究现状
    4 钙与氟中毒
        4.1 钙的生理特性
        4.2 氟中毒对机体Ca²⁺代谢的影响
        4.3 L-型钙通道与氟中毒的研究进展
    5 钙与Fas/FasL信号通路
    6 研究意义
第二章 Fas/FasL凋亡途径在氟致PC12细胞损伤中的作用
    1 引言
    2 材料与设备
        2.1 实验细胞株
        2.2 实验试剂与仪器
    3 实验方法
        3.1 PC12细胞的培养及分组
        3.2 CCK-8检测细胞活力
        3.3 DCFH-DA检测细胞内活性氧
        3.4 Annexin V-FITC检测细胞凋亡
        3.5 RT-PCR检测m RNA表达
        3.6 Western Blot检测蛋白表达
        3.7 统计学分析
    4 实验结果
        4.1 氟暴露对PC12细胞活性的影响
        4.2 氟暴露对PC12细胞活性氧水平的影响
        4.3 氟暴露对PC12细胞凋亡率的影响
        4.4 氟暴露对PC12细胞内Fas/FasL信号转导通路分子基因表达水平的影响
        4.5 氟暴露对PC12细胞内Fas/FasL信号转导通路分子蛋白表达水平的影响
    5 讨论
第三章 L-型钙通道拮抗剂对氟诱导的PC12细胞凋亡的影响
    1 引言
    2 材料与设备
        2.1 实验细胞株
        2.2 实验试剂与仪器
    3 实验方法
        3.1 PC12细胞的培养及分组
        3.2 DCFH-DA检测细胞内活性氧
        3.3 Fluo-4检测细胞内钙离子水平
        3.4 Annexin V-FITC检测细胞凋亡
        3.5 RT-PCR检测mRNA表达
        3.6 Western Blot检测蛋白表达
        3.7 细胞周期检测
        3.8 统计学分析
    4 实验结果
        4.1 氟与Nifedipine联合暴露对PC12细胞内活性氧水平的影响
        4.2 氟与Nifedipine联合暴露后对PC12细胞内钙离子的影响
        4.3 氟与Nifedipine联合暴露对PC12细胞凋亡率的影响
        4.4 氟与Nifedipine联合暴露对PC12细胞Cav1.2及Fas/FasL信号通路相关基因/蛋白表达的影响
        4.5 氟与Nifedipine联合暴露对PC12细胞周期的影响
    5 讨论
全文结论
参考文献
致谢
攻读学位期间取得的研究成果



本文编号：3991349