基于新型可注射性水凝胶包裹INS-1 832/13细胞构建生物人工胰腺的初步研究

发布时间：2025-02-08 21:13

　　目的随着糖尿病患病率的增加,为有效避免目前临床“外源性”胰岛素治疗频繁注射、必须反复监测血糖以及及时调整剂量等缺点,本文旨在通过合成一种新型可注射性葡萄糖敏感性水凝胶生物材料,包裹胰岛瘤细胞INS-1 832/13构建生物人工胰腺,期望实现响应周围葡萄糖浓度水平刺激胰岛瘤细胞分泌胰岛素,模仿胰岛素生理分泌模式与释放行为,实现平稳控制血糖。方法以3-丙烯酰胺基苯硼酸(AAPBA)和N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)为原料,马来酰化葡聚糖(Dex-Ma)为交联剂,基于过硫酸铵(APS)和四甲基乙二胺(TMEDA)氧化还原体系,于37℃温和条件下合成乳白色水凝胶。通过调整AAPBA和NIPAM单体投料比,交联剂量以及氧化还原催化体系浓度,合成低温下呈液态,37℃下呈凝胶状的温敏性水凝胶。利用红外光谱(FT-IR)分析材料的分子结构;扫描电镜(SEM)对材料进行形态学检测;并对材料的溶胀性,流变学特性以及体外胰岛素释放行为进行分析;通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法评价材料的生物相容性。基于上述性能指标的评估,选取出生物相容性良好,材料性能较佳的投料体系,包裹一种克隆性分泌胰岛素的β细胞系INS-1 ...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
1 对象和方法
    1.1 试剂与仪器
        1.1.1 主要试剂
        1.1.2 主要仪器
    1.2 3-丙烯酰胺基苯硼酸(AAPBA)的合成
        1.2.1 丙烯酰氯的制备
        1.2.2 AAPBA的合成
    1.3 马来酰化葡聚糖(Dex-Ma)的合成
    1.4 N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)的重结晶
    1.5 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)的合成
        1.5.1 交联剂Dex-Ma浓度的确定
        1.5.2 单体投料比的确定
    1.6 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)的表征
        1.6.1 红外光谱(FT-IR)
        1.6.2 扫描电镜(SEM)测定
        1.6.3 溶胀性能测定
        1.6.4 流变学特性测定
    1.7 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)胰岛素体外释放实验
        1.7.1 负载胰岛素P(AAPBA-Dex-NIPAM)水凝胶的合成
        1.7.2 胰岛素标准曲线的测定
        1.7.3 负载胰岛素P(AAPBA-Dex-NIPAM)水凝胶体外释放实验
    1.8 MTT法测试水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)的细胞毒性
        1.8.1 小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)细胞的培养
        1.8.2 MTT法测试水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)的细胞毒性
    1.9 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)包裹胰岛瘤细胞实验
        1.9.1 胰岛瘤细胞INS-1 832/13的培养
        1.9.2 水凝胶包裹INS-1 832/13细胞
        1.9.3 水凝胶包裹细胞的SEM测定
        1.9.4 吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色观察细胞生长情况
        1.9.5 ELISA法检测包裹细胞胰岛素分泌情况
2 结果
    2.1 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)结构与性质
    2.2 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)形态学测定
    2.3 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)溶胀性能的测定
    2.4 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)流变学特性的测定
    2.5 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)胰岛素体外释放实验
    2.6 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)的细胞相容性
    2.7 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)包裹胰岛瘤细胞扫描电镜实验
    2.8 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)包裹胰岛瘤细胞荧光染色实验
    2.9 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)包裹胰岛瘤细胞胰岛素分泌情况
3 讨论
    3.1 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)的结构与性质
    3.2 水凝胶P(AAPBA-Dex-NIPAM)细胞学相关测试
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 胰岛细胞移植再生工程的研究进展
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：4031997