骨质疏松患者与正常人差异血清游离miRNAs研究

发布时间：2017-06-25 00:17

  本文关键词：骨质疏松患者与正常人差异血清游离miRNAs研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景和目的：miRNA(microRNA)是一种内源性的单链非编码小RNA,通过与靶mRNA的3’UTR结合,降低其稳定性,抑制基因翻译水平。miRNA是重要的转录后水平调控因子,在细胞的分化、增殖、凋亡和代谢等生理过程中发挥广泛的调节作用。研究发现,循环血液中存在稳定的游离miRNA,且在正常人群中表达一致,当机体处于疾病状态时,血清中miRNA会发生特异性改变。miRNA在骨代谢中亦发挥重要调控作用,且日益成为研究的热点。骨质疏松症是以骨生成减少、骨吸收增加,骨骼脆性增加及易发生脆性骨折为特征的全身性疾病,且随年龄的增大,其发病率逐渐增加。本课题研究目的为,比较骨质疏松症患者和正常对照组血清中差异表达的niRNAs,利用生物信息学分析其作用靶基因,筛选骨代谢相关目标miRNAs,以探求骨质疏松症发病机制相关miRNA及相关靶基因和信号转导调节通路,研究结果为探明骨质疏松症相关miRNAs及基因调控调节机制,及今后骨质疏松症的基因治疗提供理论指导和实验依据。方法：1、收集3例骨质疏松症组患者及3例年龄、性别匹配的正常对照组的血液标本,经离心提取患者血清。然后提取血清中总RNA,经质控合格后,利用miRNA微阵列芯片技术,筛选骨质疏松组和正常对照组的差异表达miRNA,筛选差异表达的miRNA的标准为：上调及下调均miRNA Foldchange值=2,P值=0.05。 2.查询miRbase数据库进行差异的miRNA序列分析；查询niRbase以及Targetscan数据库进行靶基因预测；通过http://Diana.cslab.ece.ntua.gr/pathways/预测差异miRNA与细胞间信号传导通路的关系；在Pumbmed以及NCBI数据库查询靶基因位点注释信息。依据差异niRNA靶基因及信号通路结果,结合目前已有研究成果,选取可能的骨代谢相关目标miRNA. 结果：1.标本经质控确认合格后,根据标准筛选差异表达的miRNA。结果显示：骨质疏松组与正常对照组相比,差异表达的miRNA上调有5个,下调的有2个。2.通过对每个niRNA靶基因的预测以及相关细胞间信号传导通路的查询,结合已有研究资料,筛选出骨质疏松可能的目标miRNA2个,均为上调,分别为：hsa-miR-1321以及hsa-miR-103a-3p。3.涉及的与骨质疏松相关的靶基因有：NOTCH3、DTX1、WNT16、BTRC、AXIN2、以及WNT3A,其相关细胞间信号传导通路为Notch通路以及Wnt通路。结论：1.本课题通过对骨质疏松患者和正常对照组进行血清差异表达miRNA的对比研究,初步发现了骨质疏松患者较正常人的血清niRNA的表达存在差异,且部分差异表达的miRNA与骨代谢相关调节机制相关。 2.利用生物信息学技术对差异表达的miRNA进行分析,结合现有研究成果,筛选出了骨质疏松症可能相关miRNA及其靶基因,为骨质疏松的病理机制、早期诊断及miRNA治疗提供了参考依据。miRNA在骨质疏松症中的具体调控机制,尚需后续研究中进一步探讨。
【关键词】：骨质疏松症 miRNA 芯片检测 疾病标志物 病理机制
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R580
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 1 对象和方法15-22
• 1.1 研究对象15
• 1.2 主要试剂仪器及软件15-16
• 1.3 实验步骤16-21
• 1.4 靶基因预测及目标miRNA筛选21-22
• 2 结果22-29
• 2.1 RNA质量控制22
• 2.2 样本间及组间一致性检验22-25
• 2.3 miRNA芯片实验结果25-27
• 2.4 靶基因预测及目标miRNA筛选27-29
• 3 讨论29-42
• 3.1 成骨细胞和破骨细胞生理29-30
• 3.2 骨质疏松症30-33
• 3.3 miRNA33-35
• 3.4 骨代谢相关miRNA调控35-37
• 3.5 骨代谢相关信号转导通路37-39
• 3.6 骨质疏松相关miRNA39-42
• 结论42-43
• 参考文献43-51
• 发表论文和参加科研情况说明51-52
• 附录52-54
• 综述54-76
• 综述参考文献68-76
• 致谢76

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 张楠楠;郝艳华;;大庆地区1096例汉族人群骨密度调查及骨质疏松发生率分析[J];中国骨质疏松杂志;2013年10期

2 曾德昕;何成奇;;微小RNAs在骨与软骨组织中的调节作用[J];中国修复重建外科杂志;2011年06期

3 ;Bioinformatic analysis of microRNA biogenesis and function related proteins in eleven animal genomes[J];遗传学报;2009年10期

  本文关键词：骨质疏松患者与正常人差异血清游离miRNAs研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：480102