UPR信号通路参与低氧调控脂联素基因表达的初步研究

发布时间：2017-07-17 13:19

  本文关键词：UPR信号通路参与低氧调控脂联素基因表达的初步研究

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【摘要】：脂联素是脂肪细胞特异性分泌的脂肪因子,能够调控脂质和葡萄糖代谢,具有促胰岛素敏感性、抗炎症和抗动脉粥样硬化的作用,与肥胖、Ⅱ型糖尿病紧密相关。已有研究表明,肥胖者体内脂肪细胞局部区域为低氧环境,且其脂肪细胞和血清中的脂联素水平较正常人偏低,并且缺氧是许多疾病的病理发展过程中一个重要特点。同时,内质网应激作为机体较常见的应激反应,也与多种疾病的发生密切相关。因此,本研究利用3T3-L1细胞系,针对内质网应激即未折叠蛋白反应UPR的三条通路进行了研究,初步探索了低氧、UPR及脂联素的表达三者间的关系。首先培养并诱导分化3T3-L1细胞,之后采用低氧对该分化的脂肪细胞进行不同时间的处理,利用q RT-PCR和western blot技术检测脂联素和UPR三条通路相关基因的表达量,研究了低氧对脂联素表达的影响以及低氧对UPR三条具体通路的影响。之后采用抑制剂阻断相关信号通路,分别从基因和蛋白水平进行相关分子的表达量分析,通过通路基因的表达显著下调来确定目标通路被有效阻断,在此基础上,进一步通过检测脂联素表达的变化,推断UPR三条信号通路分别在低氧调控脂联素表达中的作用。结果表明,低氧能够抑制脂联素基因的表达,同时能够激活PERK和IRE1信号通路,但未能激活AT F6通路。当PERK和IRE1这两条通路被相应抑制剂有效阻断后,低氧对于脂联素表达的抑制作用明显减弱,初步确定PERK和IRE1信号通路参与了低氧抑制脂联素基因表达的过程。此研究结果为肥胖及糖尿病等疾病的研究及治疗提供了新思路。
【关键词】：低氧 脂联素 PERK IRE1 ATF6
【学位授予单位】：哈尔滨工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R58
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第1章 绪论8-18
• 1.1 脂联素的国内外研究进展8-11
• 1.1.1 脂联素的结构与功能8-10
• 1.1.2 脂联素与代谢性疾病10-11
• 1.2 低氧与ER stress的国内外研究进展11-15
• 1.2.1 低氧与脂联素11-13
• 1.2.2 ER stress与脂联素13-15
• 1.3 研究意义和研究内容15-18
• 1.3.1 研究意义15-16
• 1.3.2 研究内容16
• 1.3.3 技术路线16-18
• 第2章 实验材料与方法18-28
• 2.1 实验材料18-19
• 2.1.1 实验材料18
• 2.1.2 实验试剂18
• 2.1.3 实验仪器18-19
• 2.2 实验方法19-28
• 2.2.1 细胞培养19-20
• 2.2.2 细胞分化20-21
• 2.2.3 低氧处理21
• 2.2.4 RNA提取21-22
• 2.2.5 逆转录22-23
• 2.2.6 实时定量PCR23-25
• 2.2.7 蛋白印记分析25-27
• 2.2.8 统计分析27-28
• 第3章 低氧对脂联素和UPR通路的影响28-41
• 3.1 引言28
• 3.2 3T3-L1细胞的分化28-30
• 3.3 低氧对脂联素表达的影响30-31
• 3.4 低氧对UPR通路的影响31-39
• 3.4.1 低氧对PERK通路的影响32-34
• 3.4.2 低氧对IRE1通路的影响34-38
• 3.4.3 低氧对AT F6通路的影响38-39
• 3.5 讨论39-40
• 3.6 本章小结40-41
• 第4章 PERK通路对低氧抑制脂联素表达的影响41-48
• 4.1 引言41
• 4.2 PERK通路的抑制41-44
• 4.3 PERK通路抑制后低氧对脂联素的影响44-46
• 4.4 讨论46-47
• 4.5 本章小结47-48
• 第5章 IRE1通路对低氧抑制脂联素表达的影响48-54
• 5.1 引言48
• 5.2 IRE1通路的抑制48-51
• 5.3 IRE1通路抑制后低氧对脂联素的影响51-52
• 5.4 讨论52-53
• 5.5 本章小结53-54
• 结论54-55
• 展望55-56
• 参考文献56-63
• 攻读硕士学位期间发表的论文及其它成果63-65
• 致谢65

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本文编号：553782