肥胖对鼻内滴注大肠杆菌致小鼠肺脏炎症的影响研究

发布时间：2017-07-29 21:13

  本文关键词：肥胖对鼻内滴注大肠杆菌致小鼠肺脏炎症的影响研究

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【摘要】：通过向高脂饲料诱导的肥胖小鼠鼻内滴注不同数量大肠杆菌,旨在探讨肥胖对机体免疫调控及局部组织防御状态的影响,为后期开展肥胖对机体免疫功能的研究提供一定的理论依据。(1)将30只24-25日龄的昆明雄鼠随机分为：10只饲喂常规饲料作为正常组(ND组),20只饲喂高脂饲料作为高脂组(HD组),连续饲喂8周后,检测小鼠血清中抵抗素、葡萄糖、胰岛素浓度、肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数量和肺组织形态学变化。结果显示,8周后,HD组小鼠体重、附睾脂肪量、血糖、血清胰岛素、RETN浓度、Lee's指数、BALF 中 WBC、GRA、LYM、MID数量均显著高于ND组,支气管和肺泡周围炎性细胞浸润较ND组明显增加。(2)取肥胖与非肥胖小鼠各32只,肥胖小鼠分为：A(6只)、B(20只)、C(6只)组,非肥胖小鼠分为：D(6只)、E(20只)、F(6只)组。A、D组鼻内滴注40μL浓度为1×10~8 CFU/μL大肠杆菌菌液,B、E组鼻内滴注4OμL 1×10~9 CFU/μL大肠杆菌菌液,C、F组鼻内滴注40μL生理盐水。24h后,每组取6只小鼠,采集肺脏,进行大肠杆菌计数、观察病理形态。结果显示,大肠杆菌滴鼻后,A、B、D、E组小鼠出现了典型的呼吸道感染症状,其中A、D组无死亡,B、E组死亡率分别为25%和10%;肺脏中大肠杆菌数量比较,A组显著高于D组,B、E组无显著性差异；各试验组小鼠肺脏均出现了不同程度的充血出血、炎性细胞浸润等病理变化,且A组损伤大于D组,B组大于E组。(3)将180只肥胖小鼠分为：0h(6只)、Ⅰ(42只)、Ⅲ(90只)、Ⅴ(42只)组,150只非肥胖小鼠分为：0h(6只)、Ⅱ(42只)、Ⅳ(60只)、Ⅵ(42只)组。0h不做任何处理,Ⅰ、Ⅱ组鼻内滴注40μL1×10~8 CFU/μL的大肠杆菌菌液,Ⅲ、Ⅳ组鼻内滴注40μL1×10~9 CFU/μL的大肠杆菌菌液,Ⅴ、Ⅵ组鼻内滴注40gL生理盐水。于0h和感染后2、6、12、24、48、72、96h,各组随机选取6只小鼠,采集检测血液和BALF中白细胞数量,血清和肺组织中的细胞因子浓度,观察肺脏组织病理学变化。大肠杆菌滴鼻后,结果显示：①Ⅰ、Ⅱ组血液中WBC先升高,后降低,在24h降至最低,随后逐渐升高：Ⅲ、Ⅳ组WBC在2h时降低,后逐渐升高再降低,至48h时降至最低后稍有回升：②各组小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-10、RETN迅速升高并维持至48h后逐渐降低：24h内的细胞因子,Ⅰ组显著高于Ⅱ组、Ⅲ组显著高于Ⅳ组：96h时,Ⅰ组IL-10和RETN显著低于Ⅱ组,Ⅲ组IL-6、IL-10显著高于Ⅳ组。③各组小鼠BALF中WBC、GRA、LYM、MID迅速增加,至24h达到峰值后急剧下降：整个试验期间,Ⅰ组白细胞数量高于Ⅱ组,Ⅲ组高于Ⅳ组。④各组小鼠肺脏中的RETN、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、MIP-2、IL-12和MCP-1先略降低,后在24h或48h升至峰值后下降：肺脏中检测的细胞因子比较,整个试验期间,Ⅲ组高于Ⅳ组;72h内,Ⅰ组高于Ⅱ组；至96h,Ⅰ组TNF-α、IL-10、IL-12显著低于Ⅱ组,而MIP-2和IL-6显著高于Ⅱ组。⑤各组小鼠的肺脏出现了不同程度的充血出血、炎性浸润等病理变化,随后炎症消散,组织结构清晰。6h和24h时,Ⅰ组较Ⅱ组、Ⅲ组较Ⅳ组,肺脏中炎性细胞浸润更多,组织损伤更明显：96h时,Ⅱ组较Ⅰ组、Ⅲ组较Ⅳ组,组织结构更紊乱。结论：1.昆明小鼠通过连续饲喂高脂饲料8周,可成功建立肥胖模型。2.鼻内滴注40μL1×10~8 CFU/μL的大肠杆菌,成功建立了小鼠非致死性肺部感染模型；滴江40μL 1×10~9 CFU/μL的大肠杆菌,建立了昆明小鼠致死性肺部感染模型。3.肥胖提高了机体对病原菌刺激的敏感性,促进了非致死性感染小鼠肺脏的炎症消散和组织结构修复,却加剧了致死性感染小鼠肺部的炎性损伤,抑制肺脏结构与功能的恢复,延长了机体的痊愈时间。
【关键词】：肥胖 昆明小鼠 大肠杆菌 肺部感染 抵抗素
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R589.2
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 缩略词表10-14
• 第一章 文献综述14-22
• 1 肥胖对呼吸系统疾病的影响14-15
• 2 肥胖影响呼吸系统抗感染的机制15-20
• 2.1 机械因素15-16
• 2.2 生物因素16-20
• 2.2.1 糖脂代谢紊乱16
• 2.2.2 炎性细胞浸润16-17
• 2.2.3 细胞因子平衡被破坏17-20
• 2.2.3.1 肥胖对TNF-α的影响17-18
• 2.2.3.2 肥胖对IL-6的影响18-19
• 2.2.3.3 肥胖对IL-10的影响19
• 2.2.3.4 肥胖对抵抗素的影响19-20
• 3 大肠杆菌感染呼吸系统的研究进展20-21
• 4 研究目的与意义21-22
• 第二章 高脂诱导昆明小鼠肥胖模型的建立及其对肺脏的影响22-30
• 1 材料和方法22-24
• 1.1 试验动物22
• 1.2 饲料配方22-23
• 1.3 主要仪器和试剂23
• 1.4 小鼠营养性肥胖模型的建立23
• 1.5 样本采集和指标检测23-24
• 1.5.1 体质量测定23
• 1.5.2 计算Lee's肥胖指数23
• 1.5.3 血液样本处理及指标检测23
• 1.5.4 附睾脂肪含量检测23
• 1.5.5 肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数量检测23-24
• 1.5.6 组织形态学检查24
• 1.6 数据分析24
• 2 结果24-27
• 2.1 各组小鼠的体质量变化24-25
• 2.2 小鼠存活和成模情况25
• 2.3 小鼠肥胖相关指标的比较25-26
• 2.4 高脂饮食对气道炎症的影响26-27
• 2.5 高脂饮食对肺组织炎症的影响27
• 3 讨论27-28
• 4 小结28-30
• 第三章 肥胖昆明小鼠肺部感染模型的建立30-36
• 1 材料和方法30-31
• 1.1 试验菌株及菌液配制30
• 1.2 试验动物30
• 1.3 主要试剂和仪器30-31
• 1.4 试验动物分组与处理31
• 1.5 检测指标及方法31
• 1.5.1 临床观察31
• 1.5.2 肺脏中大肠杆菌计数31
• 1.5.3 肺脏病理形态学变化31
• 1.6 数据分析31
• 2 结果31-34
• 2.1 小鼠感染大肠杆菌后的临床症状31
• 2.2 小鼠感染大肠杆菌后的死亡情况31-32
• 2.3 感染小鼠肺组织中大肠杆菌计数32
• 2.4 滴鼻大肠杆菌小鼠肺组织的病理形态学变化32-34
• 3 讨论34-35
• 4 小结35-36
• 第四章 肥胖对昆明小鼠鼻内滴注大肠杆菌感染的影响36-64
• 第一节 肥胖对鼻内滴注大肠杆菌小鼠血液白细胞及炎症细胞因子的影响36-47
• 1 试验材料与方法36-37
• 1.1 试验菌株及菌液配制36
• 1.2 试验动物36
• 1.3 主要试剂和仪器36-37
• 1.4 试验动物分组与处理37
• 1.5 检测指标及方法37
• 1.5.1 血液白细胞的检测37
• 1.5.2 血清细胞因子的测定37
• 1.6 数据分析37
• 2 结果37-44
• 2.1 肥胖对大肠杆菌感染小鼠血液白细胞数量的影响37-41
• 2.2 肥胖对大肠杆菌感染小鼠血清炎症细胞因子的影响41-44
• 3 讨论44-46
• 3.1 肥胖对鼻内滴注大肠杆菌感染小鼠血液中白细胞数量的影响44-45
• 3.2 肥胖对鼻内滴注大肠杆菌感染小鼠血清细胞因子的影响45-46
• 4 小结46-47
• 第二节 肥胖对鼻内滴注大肠杆菌小鼠肺脏细胞因子及组织形态学的影响47-64
• 1 材料和方法47-48
• 1.1 试验菌株及菌液配制47
• 1.2 试验动物47
• 1.3 主要试剂和仪器47
• 1.4 试验动物分组与处理47
• 1.5 检测指标及方法47-48
• 1.5.1 BALF中白细胞数量检测47
• 1.5.2 肺组织细胞因子检测47-48
• 1.5.3 组织形态学检查48
• 1.6 数据分析48
• 2 结果48-60
• 2.1 肥胖对大肠杆菌感染小鼠BALF中白细胞数量的影响48-51
• 2.2 肥胖对大肠杆菌感染小鼠肺组织中细胞因子浓度的影响51-56
• 2.3 肥胖对大肠杆菌感染小鼠肺脏病理形态学的影响56-60
• 3 讨论60-63
• 3.1 肥胖对大肠杆菌感染初期肺脏敏感性的影响60-62
• 3.2 肥胖对大肠杆菌感染后期损伤肺组织的影响62-63
• 4 小结63-64
• 结论64-65
• 参考文献65-77
• 致谢77-78
• 攻读学位期间发表的学术论文目录78

【参考文献】

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本文编号：591119