2型糖尿病大鼠模型的建立及携带adipsin基因重组腺病毒治疗2型糖尿病大鼠模型的初步研究

发布时间：2017-08-06 17:10

  本文关键词：2型糖尿病大鼠模型的建立及携带adipsin基因重组腺病毒治疗2型糖尿病大鼠模型的初步研究

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【摘要】：2型糖尿病是由于胰岛素抵抗引起的葡萄糖代谢能力下降,并伴随着代偿性胰岛素分泌而引起的胰岛p细胞功能缺陷最终胰岛素分泌不足导致的疾病。研究表明脂肪细胞生成的细胞信号蛋白adipsin在刺激胰岛素分泌、降低胰岛素抵抗、控制血糖中具有重要的调控作用。为研究adipsin在2型糖尿病大鼠模型中的治疗作用,本研究通过重组腺病毒系统将adipsin基因传递至Zucker Diabetic Fatty (ZDF)大鼠与2型糖尿病SD大鼠体内,对2型糖尿病进行治疗,研究结果为进一步研究脂肪因子adipsin与代谢系统之间相互作用的分子机制提供了一定的实验基础。研究首先利用重组腺病毒表达系统PadEasy,构建pAdEasy-CMV-adipsin腺病毒质粒,在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒Ad-adipsin,通过PCR和免疫印迹(Western Blot)检测adipsin蛋白在HEK293细胞中获得了表达。其次,通过高脂高糖喂养并结合STZ成功诱导出具有高血糖、高血脂、胰岛素抵抗的2型糖尿病SD大鼠模型。在测定重组腺病病毒滴度后,通过尾静脉注射Ad-adipsin治疗2型糖尿病大鼠模型。结果显示,治疗后的2型糖尿病模型大鼠的空腹血糖值(FPG)、空腹胰岛素值(FINS)、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)等与注射重组腺病毒Ad-lacZ对照组2型糖尿病模型大鼠相比有显著下降(P0.05),并且胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显著降低(P0.05),其中治疗后的2型糖尿病SD大鼠血糖可以控制在较低水平长达6周。治疗结果显示重组腺病毒Ad-adipsin可以有效的改善2型糖尿病模型大鼠的糖尿病状况。
【关键词】：2型糖尿病 adipsin 重组腺病毒 基因治疗
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.1;R-332
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 前言7-10
• 第一部分 携带Adipsin基因的重组腺病毒构建及鉴定10-29
• 一、实验材料与方法10-23
• (一) 实验材料10-13
• 1、动物及细胞来源10
• 2、主要试剂及耗材10-12
• 3、主要仪器12-13
• (二) 试验方法13-23
• 1、目的基因adipsin克隆引物合成13
• 2、目的基因Adipsin的PCR扩增13-14
• 3、穿梭质粒pShuttle-CMV-adipsin的构建14-15
• 4、pAdEasy-CMV-adipsin腺病毒载体的构建15-18
• 5、重组腺病毒质粒pAdEasy-CMV-adipsin筛选18-19
• 6、重组腺病毒Ad-adipsin包装19-20
• 7、重组腺病毒Ad-adipsin扩增与形态观察20
• 8、重组腺病毒Ad-adipsin滴度测定20-22
• 9、RT-PCR检测基因adipsin在重组重组腺病毒中的转录情况22
• 10、免疫印迹(Western Blot)检测重组腺病毒中adipsin蛋白表达22-23
• 二、实验结果与分析23-27
• 1、PCR获取Adipsin目的基因23-24
• 2、Ad-adipsin构建相关质粒酶切鉴定24-25
• 3、Ad-adipsin病毒形态观察和滴度测定25-26
• 4、Ad-adipsin重组腺病毒中adipsin基因鉴定和Westernblot鉴定26-27
• 三、讨论27-29
• 第二部分 2型糖尿病大鼠模型建立与重组腺病毒Ad-adipsin对其治疗作用的评价29-44
• 一、实验材料及方法29-32
• (一) 实验材料29-30
• 1、实验动物29-30
• 2、主要试剂及耗材30
• 3、主要仪器30
• (二) 实验方法30-32
• 1、高脂高糖结合STZ诱导2型糖尿病SD大鼠模型建立30-31
• 2、重组腺病毒Ad-adipsin对2型糖尿病大鼠模型ZDF大鼠治疗作用及评价31-32
• 3、重组腺病毒Ad-adipsin对高脂高糖诱导联合STZ 2型糖尿病大鼠治疗作用及评价32
• 4、统计学方法32
• 二、实验结果与分析32-42
• 1、高脂高糖喂养联合STZ建立2型糖尿病大鼠模型评价32-36
• 2、重组腺病毒Ad-adipsin治疗ZDF大鼠及评价结果36-39
• 3、重组腺病毒Ad-adipsin治疗高脂高糖联合STZ诱导2型糖尿病大鼠及评价结果39-42
• 三、讨论42-44
• 小结44-45
• 参考文献45-49
• 附录49-56
• 致谢56-57
• 研究生简历57-59

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本文编号：630694