环状RNA在系统性红斑狼疮患者中差异表达的研究

发布时间：2017-08-09 22:09

  本文关键词：环状RNA在系统性红斑狼疮患者中差异表达的研究

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【摘要】：目的:应用circRNA芯片技术分析系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中环状RNA的差异表达,为进一步探索差异性表达的环状RNA作为SLE诊断生物标志物及其调控机制研究奠定基础。方法:10例SLE患者(SLE组)、10例类风湿关节炎患者(RA组)及10例正常健康对照者(NC组)为实验对象,分别收集实验参与者的外周静脉血并分离出外周血单个核细胞,提取总RNA,利用circRNA芯片技术,筛查系统性红斑狼疮单个核细胞中差异性表达的环状RNA,运用生物信息学方法得到与环状RNA相关的miRNA,最后运用实时定量PCR对部分环状RNA进行验证。结果:与健康对照组相比,显著差异性表达的环状RNA有745种,其中182种表达上调,563种表达下调;与RA组相比,显著差异性表达的环状RNA有671种,其中225种表达上调,446种表达下调。应用实时定量PCR验证6种表达上调环状RNA:hsa_circ_0007337、hsa_circ_0047891、hsa_circ_0001349、hsa_circ_0046555、hsa_circ_0046215、hsa_circ_0056536表达呈上调趋势;5种表达下调circRNA:hsa_circ_0070113、hsa_circ_0005480、hsa_circ_0001854、hsa_circ_0044468、hsa_circ_0006608表达呈下调趋势,和芯片结果一致。生物信息学提示环状RNA可以通过与miRNA发生相互作用从而调控系统性红斑狼疮的发生和发展。结论:SLE患者单个核细胞环状RNA的表达具有疾病特异性,显著差异的和特异性表达的环状RNA可作为系统性红斑狼疮潜在的诊断标志物。此外,差异性表达的环状RNA的生物信息学有助于系统性红斑狼疮发病机制研究,可作为机制研究的参考和补充。
【关键词】：环状RNA circRNA芯片 系统性红斑狼疮
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R593.241
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 1.前言7-15
• 1.1 circRNA研究现状8-12
• 1.2 circRNA与自身免疫性疾病12-13
• 1.3 circRNA基因芯片、RT-PCR技术对SLE circRNA的综合研究13-15
• 2.实验材料和方法15-25
• 2.1 临床资料15
• 2.2 实验所需试剂和耗材15-16
• 2.3 实验所需仪器16-17
• 2.4 人外周血单个核细胞分离17-18
• 2.5 Total RNA的提取18
• 2.6 RNA质量检测18-20
• 2.7 标记反应20-21
• 2.8 标记/扩增的RNA的纯化和标记cRNA的质量控制21-22
• 2.9 杂交22-23
• 2.10 芯片洗涤23-24
• 2.11 图像扫描及数据分析24
• 2.12 实时定量PCR验证差异性表达circRNA24-25
• 3.结果25-47
• 3.1 Total RNA抽提与质检结果25-26
• 3.2 circRNA芯片检测结果26-40
• 3.3 miRNA预测40-45
• 3.4 RT-PCR验证差异性circRNA45-47
• 4.讨论47-50
• 5.本实验的不足和未来研究的方向50-52
• 6.结论52-53
• 参考文献53-61
• 缩略词表61-63
• 附录63-65
• 致谢65

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