LXA4干预尿酸诱导人脐静脉内皮细胞发生氧化应激反应机制研究
发布时间：2017-08-12 16:11
本文关键词：LXA4干预尿酸诱导人脐静脉内皮细胞发生氧化应激反应机制研究
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【摘要】：目的:探讨脂氧素A4(LXA4)干预尿酸(Uric acid,UA)诱导的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)发生氧化应激反应,并初步探讨其可能的机制。方法:1.培养符合实验要求的HUVEC。2.UA作用最佳浓度及作用最佳时间选择:以不同浓度UA(0mg/dL,4mg/dL,8mg/dL,12mg/dL,16mg/dL)与HUVEC作用24h,或选择12mg/dL浓度UA按不同时间(0h、3h,6h,12h,24h,48h)与HUVEC作用,利用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)作为荧光探针测定HUVEC活性氧(Reactive oxygen species,ROS)生成量。3.LXA4作用最佳浓度及作用最佳时间选择:选择不同浓度LXA4(0nM、1nM、10nM、100nM)或不同时间(0min、15 min、30 min、1h、2h)对HUVEC预处理,选择12mg/dL浓度UA作用24h后,利用DCFH-DA测定HUVEC生成ROS量。4.不同抑制剂干预作用:以LXA4(100nM)、二甲苯基碘(10μM)、鱼藤酮(1μM),进行预处理,选择12mg/dL浓度UA与HUVEC作用24h后,检测ROS生成量。5.HUVEC内NADPH氧化酶活性:将实验分为对照组、UA组、LAX4组,UA+LXA4组,采用光泽精增强的化学发光法测定NADPH氧化酶活性。6.NADPH氧化酶p47phox亚基表达:将实验分为对照组、UA组、LAX4组,UA+LXA4组,分别提取细胞质和细胞膜蛋白,免疫印迹法(Western Blot)测定NADPH氧化酶亚基p47phox在细胞质和细胞膜的蛋白表达。结果:1.UA溶液可以诱导HUVEC生成ROS,呈浓度依赖和时间依赖,P0.05;在12mg/dL浓度作用24h时间点UA刺激HUVEC生成ROS量最大,P0.05。2.与UA刺激组比较,LXA4可以降低12mg/dL的UA作用24h诱导HUVEC生成ROS的量,P0.05;与UA刺激组比较,DPI也可以明显降低高浓度UA诱导HUVEC生成ROS的量,P0.05;但鱼藤酮对UA诱导HUVEC生成ROS干预不明显,P0.05。3.与对照组比较,UA组NDAPH氧化酶活性明显增加,P0.05,而单独LXA4组无明显变化,P0.05;与UA刺激组比较,LXA4+UA组NDAPH氧化酶活性明显下降,P0.05。4.NDAPH氧化酶p47phox蛋白表达量:(1)在胞质:与对照组比较,UA刺激组p47phox含量明显下降,而在LXA4预先干预后,p47phox含量明显增加,P0.05;(2)在胞膜:与对照组比较,UA刺激组p47phox含量明显增加,在LXA4预先干预后,p47phox含量明显降低,P0.05。结论:LXA4可以抑制高浓度UA溶液诱导HUVEC发生氧化应激反应生成ROS,其可能的机制是通过阻止NADPH氧化酶亚基p47phox由胞质转移到胞膜来抑制NADPH氧化酶激活,从而减少ROS的生成。
【关键词】：脂氧素A4 尿酸 人脐静脉内皮细胞 氧化应激反应 活性氧
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R589.7
【目录】：
- 致谢4-5
- 摘要5-7
- Abstract7-11
- 前言11-16
- 材料与方法16-21
- 第一部分 尿酸诱导HUVEC发生氧化应激反应生成ROS21-28
- 实验方法21-23
- 结果23-25
- 讨论25-28
- 第二部分LXA4干预UA诱导HUVEC发生氧化应激反应生成ROS的机制28-46
- 实验方法28-34
- 结果34-39
- 讨论39-46
- 结论46-47
- 不足与展望47-48
- 参考文献48-53
- 综述：脂氧素调控炎症信号通路的研究进展53-65
- 参考文献61-65
- 附录65-67
- 个人简历67
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本文编号：662462
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