AG490对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的免疫治疗作用

发布时间：2017-08-12 22:17

  本文关键词：AG490对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的免疫治疗作用

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【摘要】：研究背景及目的：重症肌无力是由针对神经肌肉接头处肌膜的特异性抗体导致的一种自身免疫性疾病,以波动性肌无力和易疲劳为特征。实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis, EAMG)是用电鳐的AchR (Acetylcholine receptor, AchR)或大鼠AchR的a亚基的97-116肽段免疫Lewis 大鼠从而建立大鼠EAMG模型,破坏了机体对AchR的免疫耐受,诱导形成攻膜复合物攻击突触后膜上的AchR,致使其数量减少和结构破坏[11,是研究人类重症肌无力发病机制和治疗策略的可靠模型。JAK2/STAT3通路是细胞因子发挥作用的重要信号转导通路,其在发起固有免疫、调节适应性免疫过程中发挥重要作用。JAK2下游的STAT3分子是决定T细胞及B细胞分化的关键因子[2],介导了与细胞因子IL-6、IL-21的信号传导相关的炎症反应。近来研究指出IL-6通过促进CD4+T细胞分泌高水平的IL-21,进而间接诱导B细胞的分化、增殖并向浆细胞转化[3],在重症肌无力这种抗体介导的自身免疫性疾病发病中发挥了重要作用。AG490作为JAK2/STAT3相对特异性阻滞剂,能够阻断细胞因子引起的JAK2激酶以及下游转录因子STAT3的磷酸化[4],从而阻断信号转导。目前JAK2/STAT3通路能否作为一种治疗MG的新靶点尚无相关研究,故本实验目的在于研究JAK2/STAT3通路阻断剂AG490 对 EAMG大鼠的免疫治疗作用。研究目的：JAK2/STAT3通路抑制剂AG490对EAMG大鼠的免疫治疗作用。研究方法：1.建立EAMG动物模型并临床评分用人工合成的大鼠乙酰胆碱受体α[亚基的97-116肽段免疫Lewis大鼠,建立IEAMG模型,将12只大鼠随机、平均分为AG490治疗组及对照组,采用双盲法隔日评估大鼠临床症状并采用Lennon评分标准评分。2.AG490治疗EAMG大鼠EAMG大鼠发病初期,AG490治疗组隔日给予AG490(溶于聚乙,二醇)0.2 ml腹腔注射治疗,至第43天。对照组给予等体积聚乙二醇。3.制备淋巴结单个核细胞第43天处死大鼠,无菌条件下取腹股沟淋巴结并研磨制备淋巴结单个核细胞悬液。4.检测淋巴细胞增殖取上述淋巴结单个核细胞悬液,分别采用CCK-8及CFSE法检测淋巴结单个核细胞的增殖。5.检测细胞因子IL-6及IL-21的表达取上述淋巴结单个核细胞悬液,分别加入加入IL-6、IL-21抗体,二抗PE标的IgG2b,流式细胞仪检测IL-6及IL-21的表达。6. ELISA检测血清中抗R97-116抗体水平处死大鼠取心脏血血清,ELISA检测血清中的抗R97-116抗体及其亚型水平。7.统计学分析应用独立样本t检验比较2组标本间的差异,p0.05视为差异有统计学意义。结果：1.AG490能缓解EAMG大鼠肌无力临床症状。2.AG490抑制淋巴细胞和CD4+T细胞的增殖。3.AG490抑制细胞因子IL-6、IL-21的表达。4.AG490降低EAMG大鼠血清中抗R97-116抗体水平。结论：JAK2/STAT3通路抑制剂AG490通过抑制细胞因子IL-6及IL-21的分泌,从而降低血清中抗R97-116抗体IgG、IgG2b水平,缓解EAMG大鼠病情。为临床上治疗重症肌无力提供了新的思路。
【关键词】：AG490 实验性自身免疫性重症肌无力 IL-6 IL-21 IgG IgG2b
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R746.1
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符号说明11-12
• 前言12-16
• 材料与方法16-22
• 结果22-24
• 讨论24-36
• 结论36-38
• 附图38-42
• 参考文献42-50
• 致谢50-52
• 攻读学位期间发表的学术论文目录52-54
• 学位论文评阅及答辩情况表54

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本文编号：663910