高糖环境对人脐静脉血管内皮细胞坏死性凋亡及IL-6表达的影响

发布时间：2017-08-18 05:04

  本文关键词：高糖环境对人脐静脉血管内皮细胞坏死性凋亡及IL-6表达的影响

  更多相关文章： 受体相互作用蛋白激酶1 受体相互作用蛋白激酶3 白细胞介素-6 坏死性凋亡 内皮细胞

【摘要】：目的:通过体外实验,观察高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中的RIP1、RIP3和IL-6表达情况,探讨坏死性凋亡对HUVECs损伤的作用及机制。方法:通过对HUVECs的体外培养,采用免疫荧光法测定HUVECs的标记性抗原(凝血因子VIII)表达情况来进行细胞鉴定,根据不同干预条件,随机分成三组:正常组(葡萄糖含量为5.5mmol/L),高糖组(葡萄糖含量为30mmol/L),甘露醇组(葡萄糖含量为5.5mmol/L+甘露醇含量为24.5mmol/L),采用real-time PCR检测RIP1、RIP3、IL-6的m RNA表达情况,采用免疫细胞化学与蛋白印迹法(WB)检测RIP1、RIP3、IL-6的蛋白表达情况。结果:1.免疫荧光:HUVECs可表达凝血因子VIII,且主要表达于细胞浆中,细胞鉴定为HUVECs。2.RT-PCR:高糖刺激HUVECs后,RIP1、RIP3、IL-6的m RNA表达量明显增加,均高于正常组与甘露醇组(P0.05),而在正常组与甘露醇组之间上述各指标表达无差别(P0.05)。高糖组IL-6与RIP1、RIP3 m RNA的相对表达量均呈显著正相关性(分别为r=0.961,P0.001;r=0.801,P=0.010)。3.免疫细胞化学:RIP1、RIP3、IL-6主要在HUVECs的细胞浆中表达,高糖刺激HUVECs后,RIP1、RIP3、IL-6的蛋白表达量明显增加,均高于正常组与甘露醇组(P0.05),而在正常组与甘露醇组之间上述各指标表达无差别(P0.05)。高糖组IL-6与RIP1、RIP3的IOD值均呈显著正相关性(分别为r=0.755,P=0.019;r=0.810,P=0.008)。4.蛋白印迹法(Western Blot):高糖刺激HUVECs后,RIP1、RIP3、IL-6的蛋白表达量显著增长,均高于正常组与甘露醇组(P0.05),而在正常组与甘露醇组之间上述各指标表达无差别(P0.05)。高糖组IL-6与RIP1、RIP3的蛋白表达量均呈显著正相关性(r=0.908,P0.001;r=0.966,P0.001)。结论:高糖环境下,人脐静脉内皮细胞的RIP1与RIP3表达量均增加,说明细胞发生坏死性凋亡增加,该类程序化死亡可能进一步导致细胞炎症因子IL-6表达量增多,坏死性凋亡和IL-6相互作用,加重了人脐静脉内皮细胞的炎症反应和损伤。
【关键词】：受体相互作用蛋白激酶1 受体相互作用蛋白激酶3 白细胞介素-6 坏死性凋亡 内皮细胞
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 英缩略词对照表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料与方法11-22
• 结果22-35
• 讨论35-38
• 结论38-39
• 参考文献39-42
• 综述42-50
• 参考文献47-50
• 致谢50-51
• 作者简介51-52

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本文编号：692761