与H3K4me2相关的系统性红斑狼疮发病机制研究

发布时间：2017-08-19 00:03

  本文关键词：与H3K4me2相关的系统性红斑狼疮发病机制研究

  更多相关文章： 系统性红斑狼疮 组蛋白甲基化 染色质免疫沉淀 核小体

【摘要】：目的 以H3组蛋白第4位赖氨酸二甲基化(dimethylation of histone H3 at lysine 4, H3K4me2)为分子靶标,采用染色质免疫沉淀-高通量测序(chromatin immunoprecipitation deep sequencing, ChIP-seq)技术,分析系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单核细胞中可能的转录激活基因,探讨其发病机制。方法1.收集临床病例,采集外周静脉血,采用葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法(Ficoll-hypaque density gradient centrifugation, Ficoll-Paque)分离单核细胞。2.核酶(Micrococcal nucleas, MNase)处理外周血单核细胞,并通过超声物理剪切,使染色质以单个或几个核小体形式存在。3.以H3K4me2抗体,免疫沉淀经MNase酶处理及超声剪切后的染色质；逆转蛋白/DNA复合物的交联结构,释放DNA。4.通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction, real-time Q-PCR)证明染色质免疫沉淀结果是否可靠。5.采用ThruPLEXTM-FD Prep Kit构建文库。6.将建库所得样本进行高通量测序分析及后续的生物信息学分析。结果SLE患者外周血单核细胞转录激活的相关基因主要包括：钙调蛋白依赖性蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent kinase, CaMK), CREMa(cAMP responsive element modulator (CREM) α subunit), IL-6、IL-10、IL-17细胞因子。结论H3K4me2分析提示的转录激活基因中CREMa转录因子激活是关键,其活性可由CaMK调控；CREMa转录因子激活,然后通过表观遗传调控机制可影响多个细胞因子表达及T细胞亚群形成。这表明CREMa在SLE患者异常的T淋巴细胞分子信号通路中有重要作用。
【关键词】：系统性红斑狼疮 组蛋白甲基化 染色质免疫沉淀 核小体
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R593.241
【目录】：

• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-8
• 前言8-10
• 第一部分 细胞处理实验10-24
• (一) 人外周血单核细胞的分离实验10-14
• 1. 材料与方法10-11
• 1.1. 仪器与试剂10
• 1.2. 实验方法10-11
• 2. 结果11-12
• 3. 分析与讨论12-14
• (二) MNase酶处理细胞实验14-24
• 1. 材料与方法14-16
• 1.1. 仪器与试剂14
• 1.2. 实验方法14-16
• 2. 结果16-22
• 2.1. 细胞数量、MNase酶用量、超声时间的确定16-20
• 2.2. 样本的处理20-22
• 3. 分析与讨论22-24
• 第二部分 染色质免疫共沉淀实验24-34
• (一) 染色质免疫共沉淀实验24-28
• 1. 材料与方法24-26
• 1.1. 仪器与试剂24
• 1.2. 实验方法24-26
• 2. 结果26
• 3. 分析与讨论26-28
• (二) 实时荧光定量PCR实验28-34
• 1. 材料与方法28-31
• 1.1. 仪器与试剂28
• 1.2. 实验方法28-31
• 2. 结果31-32
• 3. 分析与讨论32-34
• 第三部分 高通量测序文库构建实验研究34-43
• (一) 文库构建实验34-37
• 1. 材料与方法34-36
• 1.1. 仪器与试剂34
• 1.2. 实验方法34-36
• 2. 结果36-37
• (二) Aglient 2100质检实验37-43
• 1. 材料与方法37-38
• 1.1. 仪器与试剂37
• 1.2. 实验方法37-38
• 2. 结果38-41
• 3. 分析与讨论41-43
• 第四部分 健康对照组实验结果43-45
• 第五部分 高通量测序及生物信息学分析实验45-49
• 1. 实验方法45
• 2. 结果45-47
• 3. 分析与讨论47-49
• 第六部分 全文小结49-50
• 第七部分 展望50-51
• 参考文献51-55
• 附图55-56
• 致谢56-57
• 文献综述57-64
• 参考文献60-64

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本文编号：697496