脂多糖在眼眶成纤维细胞异常增殖中的作用和机制的初步研究

发布时间：2017-08-19 08:19

  本文关键词：脂多糖在眼眶成纤维细胞异常增殖中的作用和机制的初步研究

  更多相关文章： 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 CD90 脂多糖 增殖

【摘要】：目的:通过利用脂多糖(LPS)刺激体外培养的表型为CD90+及CD90-的甲状腺相关眼病(TAO)患者的眼眶成纤维细胞,比较相同浓度的脂多糖对不同CD90表型的眼眶成纤维细胞增殖情况的影响以及其炎性因子表达的作用,初步探讨LPS在甲状腺相关眼病中引起脂肪增殖中的机制。方法:(1)原代培养6例TAO患者的脂肪/结缔组织来源的眼眶成纤维细胞,随机分成7组,分别采用0 ng/ml,50 ng/ml,100 ng/ml,200 ng/ml,500 ng/ml,1000 ng/ml,2000 ng/ml LPS进行刺激。CCK-8(cell counting kit-8)试剂盒检测各组眼眶成纤维细胞增殖情况,探索最佳刺激浓度;(2)利用流式细胞仪进行分选,筛选出CD90-成纤维细胞;(3)构建CD90过表达慢病毒,转染CD90-细胞;将细胞分为A(空白病毒)、B(CD90过表达病毒)两组,每组用摸索得到的最佳LPS浓度进行刺激。CCK-8试剂盒检测各组眼眶成纤维细胞增殖情况;逆转录聚合酶链反应法(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western-blot法检测各组CD90基因及蛋白的表达,并使用RT-PCR检测各组IL-6、IL-1及TNF-α的表达量。结果:(1)TAO患者眼眶成纤维细胞体外培养成功,成功分选出表型为CD90-的眼眶成纤维细胞,在LPS浓度为500 ng/ml时,成纤维细胞增殖20%,为最佳刺激浓度。(2)成功制备过表达CD90的慢病毒,并转染CD90-眼眶成纤维细胞。(3)以500 ng/ml LPS刺激眼眶成纤维细胞后,对照组及CD90过表达组间的细胞增殖没有明显变化;同等浓度LPS刺激CD90-眼眶成纤维细胞后,IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌增多,CD90过表达组眼眶成纤维细胞IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌减弱,有统计学意义(P0.05)。结论:脂肪/结缔组织来源的眼眶成纤维细胞经LPS刺激可产生炎性反应,同时IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌增多。CD90表型不同的眼眶成纤维细胞在LPS刺激下的增殖未见显著差异。
【关键词】：甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 CD90 脂多糖 增殖
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R777.5;R581
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 缩略词表8-9
• 前言9-11
• 第一部分 眼眶成纤维细胞的培养、鉴定及分选11-21
• 一、材料与方法11-15
• 二、实验结果15-20
• 三、结论20-21
• 第二部分 CD90慢病毒的制备及转染21-42
• 一、过表达慢病毒克隆的制备21-30
• 二、CD90过表达慢病毒包装与质量检测30-38
• 三、感染预实验38
• 四、实验步骤38-40
• 五、实验结果40-41
• 六、实验结论41-42
• 第三部分 LPS对不同表型眼眶成纤维细胞的增殖及分泌功能的作用42-56
• 一、材料与方法42-51
• 二、实验结果51-55
• 三、实验结论55-56
• 讨论56-59
• 综述59-63
• 参考文献63-68
• 致谢68

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本文编号：699636