1型1-磷酸鞘氨醇受体的siRNA对人涎腺导管上皮细胞的作用

发布时间：2017-08-23 14:17

  本文关键词：1型1-磷酸鞘氨醇受体的siRNA对人涎腺导管上皮细胞的作用

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【摘要】：目的:构建靶向1型1-磷酸鞘氨醇受体(sphingosine 1-phosphate receptor-1,S1P1)基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)慢病毒表达载体,感染干燥综合征细胞模型——人涎腺导管上皮细胞(human salivary gland cells,HSG),探讨S1P1的siRNA治疗干燥综合征的可能性,为临床靶标治疗提供广阔的思路。方法:实验分空白组、空载体组、scramble-siRNA组及S1P1-siRNA组,分别将p LL3.7空载体、构建成功的scramble-siRNA及S1P1-siRNA慢病毒表达载体与p MD2.G、p MDL g/p RRE、pRSV-REV共转染293T细胞制备病毒,感染HSG细胞株48 h,流式细胞术检测其感染效率,实时荧光定量RT-PCR法检测HSG细胞中S1P1 mRNA的表达水平,细胞免疫组织化学法检测细胞中S1P1蛋白的表达水平,ELISA法检测细胞上清中γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素(interleukin,IL)-17的表达水平。结果:(1)成功构建scramble-siRNA、S1P1-siRNA慢病毒表达载体,慢病毒的滴度约为3.5×108TU/m L。(2)感染48 h后S1P1-siRNA组HSG细胞中S1P1 mRNA的表达水平明显低于空白组、空载体组和scramble-siRNA组,差异有统计学意义(P0.05)。(3)S1P1-siRNA组HSG细胞中S1P1蛋白的表达水平低于空白组、空载体组和scramble-siRNA组,差异有统计学意义(P0.05)。(4)S1P1-siRNA组HSG细胞分泌的IL-17的浓度明显降低,与空白组、空载体组和scramble-siRNA组比较差异有统计学意义(P0.05)。(5)S1P1-siRNA组细胞上清液中IFN-γ的浓度降低,与空白组、空载体组和scramble-siRNA组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:成功构建了靶向S1P1基因的慢病毒载体,S1P1 siRNA可以使S1P1 mRNA和蛋白表达水平下降,细胞上清液中IL-17和IFN-γ的浓度下降,证明S1P1 siRNA可转染HSG细胞且特异、高效地抑制S1P1基因的表达,抑制细胞上清液中细胞因子的表达,为治疗干燥综合征奠定了实验基础。
【作者单位】： 包头医学院第一附属医院风湿免疫科;内蒙古自治区自体免疫学重点实验室;
【关键词】： 受体 鞘磷脂 RNA 小分子干扰 涎腺 腺泡细胞 遗传载体
【基金】：内蒙古自治区科技计划项目(20120403) 国家自然科学基金(81360463)资助~~
【分类号】：R593.2
【正文快照】： 内蒙古自治区包头014010)sion of S1P1 protein was lower in S1P1-siRNA group than those in blank group,empty vector group,andscramble-siRNA group 48 h after transfection,there were significant differences between them(P0.05).(4)The levels of IL-17 were low

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本文编号：725501