报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白生物学活性

发布时间：2017-08-31 01:20

  本文关键词：报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白生物学活性

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【摘要】：目的:建立报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-HSA,Byetalog)生物学活性。方法:将胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-likepeptide 1 receptor,GLP-1R)表达载体和c AMP反应元件(c AMP response element,CRE)报告基因载体共转染CHO-K1细胞,经加压筛选和单克隆分离培养获得稳定的单克隆细胞株;使用药物反应强的单克隆细胞株建立报告基因方法;对新建方法进行条件优化,并用优化的方法对促胰岛素分泌肽融合蛋白原液和成品进行生物学活性测定。结果:经加压筛选和单克隆分离培养后获得对Byetalog强反应性的细胞株CHOglpar/crec14;新建方法剂量反应曲线符合四参数方程,R~2大于0.99;对促胰岛素分泌肽融合蛋白的原液和成品分别测定3次,RSD值均低于5.0%,回收率在70%~130%之间。结论:报告基因法操作简便,重复性和准确性都较高,有望作为替代方法应用于促胰岛素分泌肽融合蛋白的生物学活性测定。
【作者单位】： 北京市药品检验所;中国食品药品检定研究院;
【关键词】： 促胰岛素分泌肽融合蛋白 转基因细胞 报告基因法 CRE GLP-R 生物学活性测定
【基金】：国家“重大新药创制”科技重大专项(2012ZX09304010) 博士后基金(2015M571230)
【分类号】：R587.1
【正文快照】： 糖尿病是世界性疾病,发病率居高不下,严重威胁人类健康。糖尿病主要分为1型和2型,后者占糖尿病患者的90%以上。胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide 1,GLP-1)及其类似物近年来成为2型糖尿病治疗领域的研究热点[1-4]。GLP-1可以有效解决当前2型糖尿病治疗的多重挑战:可有效

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本文编号：762612