氧化应激在类固醇糖尿病大鼠胰岛细胞损伤中的作用及分子机制

发布时间：2017-09-03 13:31

  本文关键词：氧化应激在类固醇糖尿病大鼠胰岛细胞损伤中的作用及分子机制

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【摘要】：目的采用高脂饮食联合地塞米松腹腔注射的方法建立类固醇糖尿病SD大鼠模型,观察大鼠胰岛素的分泌和胰岛细胞凋亡情况,以及体内氧化应激程度和转录因子Fox O1、PDX-1、Maf A表达水平,探讨类固醇糖尿病的发病机制。方法8周龄健康雄性SD大鼠40只,随机分为2组:HFD组以MD45%脂肪饲料喂养,ND组以普通维持饲料喂养。喂养12 w后,将HFD组随机分成HFD+DEX亚组和HFDO亚组,ND组随机分成ND+DEX亚组和NDO亚组,对HFD+DEX亚组和ND+DEX亚组以5 mg/(kg.d)的地塞米松行腹腔注射,其余2组以等剂量的生理盐水在同部位行腹腔注射,各亚组喂养饲料不变。以连续2次FBG≥16.7mmol/L界定为SDM模型建成的标准,16 w后处死大鼠,分离胰腺,取尾静脉血离心后备用。实验过程中定期监测体重、FBG、FIN、血浆TG、TC含量,并进行OGTT。HE染色观察胰岛结构;TUNEL法检测胰岛细胞凋亡情况;IHC检测胰腺PI、Bcl-2、Bax、Fox O1、PDX-1、Maf A的蛋白表达水平;Elisa法检测血浆中INS和C肽含量;用相应试剂盒检测血浆中SOD活力、GSH、MDA及胰腺组织ROS含量。结果1第12周,与ND组相比,HFD组大鼠体重升高(t=91.286,P0.01),血浆甘油三酯、总胆固醇含量升高(t=17.280,P0.01;t=21.925,P0.01),空腹胰岛素升高(t=8.621,P0.01),葡萄糖曲线下面积增大(t=2.629,P0.05),胰岛素抵抗指数增大(t=6.271,P0.01),但空腹血糖变化不明显(t=-1.297,P0.05)。2第16周,与NDO亚组相比,ND+DEX亚组大鼠体重下降(t=-93.736,P0.01),空腹血糖升高(t=152.438,P0.01),血浆甘油三脂、总胆固醇升高(t=10.115,P0.01;t=2.172,P0.05),葡萄糖曲线下面积增大(t=39.620,P0.01),血浆胰岛素、C肽含量降低(t=-40.306,P0.01;t=-113.627,P0.01),血浆SOD活力、GSH含量降低(t=-17.825,P0.01;t=-44.935,P0.01),ROS和MDA含量升高(t=133.179,P0.01;t=28.748,P0.01),凋亡指数增加(t=18.671,P0.01),Bcl-2/Bax降低(t=-8.218,P0.01),PI蛋白表达减少(t=-23.277,P0.01),Fox O1蛋白核表达增加(t=18.562,P0.01),Maf A与PDX-1蛋白表达下降(t=-15.011,P0.01;t=-12.250,P0.01)。与HFDO亚组相比,HFD+DEX亚组大鼠体重下降(t=-258.992,P0.01),空腹血糖升高(t=156.406,P0.01),血浆甘油三脂、胆固醇升高(t=2.593,P0.05;t=2.844,P0.05),葡萄糖曲线下面积增大(t=190.725,P0.01),血浆胰岛素、C肽含量降低(t=-48.990,P0.01;t=-159.606,P0.01),血浆SOD活力、GSH含量降低(t=-19.773,P0.01;t=-37.030,P0.01),ROS和MDA含量升高(t=106.208,P0.01;t=33.912,P0.01),凋亡指数增加(t=15.391,P0.01),Bcl-2/Bax降低(t=-15.777,P0.01),PI蛋白表达减少(t=-27.159,P0.01),Fox O1蛋白核表达增加(t=14.710,P0.01),Maf A与PDX-1蛋白表达下降(t=-14.713,P0.01;t=-10.750,P0.01)。结论类固醇糖尿病大鼠胰岛功能下降可能与机体氧化应激反应加剧,引起胰岛细胞转录因子Fox O1入核表达增多,从而抑制转录因子PDX-1和Maf A的蛋白表达,Bcl-2、Bax失衡及胰岛细胞凋亡增加有关。
【关键词】：氧化应激 类固醇糖尿病 胰岛细胞
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.1
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-14
• 第1章 实验研究14-61
• 1.1 材料与方法14-26
• 1.1.1 实验动物与分组14-15
• 1.1.2 主要实验仪器与试剂15-17
• 1.1.3 模型制备及取样17-18
• 1.1.4 观察指标及方法18-26
• 1.1.5 统计分析26
• 1.2 实验结果26-49
• 1.2.1 大鼠一般生理状态26-28
• 1.2.2 大鼠血糖相关检测指标28-33
• 1.2.3 大鼠HOMA-IR结果33
• 1.2.4 大鼠血浆TG、TC含量33-35
• 1.2.5 大鼠血浆INS和C肽含量35-37
• 1.2.6 大鼠体内氧化应激产物37-39
• 1.2.7 大鼠胰岛形态学改变39-41
• 1.2.8 大鼠胰岛细胞凋亡41-42
• 1.2.9 大鼠胰岛免疫组化结果42-49
• 1.3 讨论49-56
• 1.3.1 SDM动物模型的建立49-52
• 1.3.2 SDM机体氧化应激反应52-53
• 1.3.3 SDM胰岛细胞凋亡53-54
• 1.3.4 SDM胰岛细胞FoxO1、MafA、PDX-1 表达54-56
• 1.4 小结56
• 参考文献56-61
• 第2章 综述氧化应激与糖尿病JNK信号转导通路及相关转录因子的研究进展61-70
• 2.1 氧化应激对机体的损伤机制61-63
• 2.2 JNK信号传导通路63-64
• 2.3 FoxO1对MafA、PDX-1 的调节64-67
• 2.3.1 FoxO1转录因子64-65
• 2.3.2 MafA和PDX-1 转录因子65-67
• 2.4 结语67
• 参考文献67-70
• 结论70-71
• 致谢71-72
• 导师简介72-73
• 作者简介73-74
• 学位论文数据集74

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本文编号：785301