MiRNA-138对气道上皮细胞上皮—间质转分化影响的研究

发布时间：2017-09-04 10:17

  本文关键词：MiRNA-138对气道上皮细胞上皮—间质转分化影响的研究

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【摘要】：研究背景气道重塑重要标志为气道上皮细胞脱落,细胞外基质沉积,成纤维细胞和肌成纤维细胞增殖,引起基底膜增厚和上皮下纤维化。气道上皮细胞上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)改变被认为参与了这一过程。目前认为气道上皮异常损伤修复参与了哮喘气道重塑,气道上皮细胞发生EMT可能参与了气道重塑。EMT是上皮细胞转分化为间质细胞的过程。许多研究发现,哮喘患者及小鼠肺泡灌洗液及气道壁内TGF-β1增高,因此TGF-β1与哮喘气道重塑密切相关[1,2],而且TGF-β1是诱导EMT的重要细胞因子。MiRNA通过其种子序列与靶mRNA 3’-UTR端非翻译区特异性结合而抑制其靶基因的翻译。研究表明上调miRNA-138可以抑制非小细胞肺癌细胞如A549细胞株发生EMT[3,4]。MiRNA-138抑制肺上皮来源的肿瘤细胞发生EMT,是否也在气道上皮细胞产生EMT过程中异常表达,上调miRNA-138能否也抑制气道上皮细胞发生EMT,从而抑制气道重塑?因此,本实验旨在探讨TGF-β1是否能诱导小鼠气道上皮细胞发生EMT及miRNA-138能否阻止TGF-β1诱导的气道上皮细胞发生EMT,从而为研究哮喘气道重塑机制提供依据。研究目的验证TGF-β1是否可以诱导小鼠气道上皮细胞株TC-1发生EMT;验证miRNA-138是否在TC-1细胞株发生EMT时异常表达;验证miRNA-138过表达能否抑制TGF-β1诱导的EMT;研究方法1、予TGF-β1刺激小鼠气道上皮细胞株TC-1细胞,Western Blot检测TGF-β1诱导TC-1细胞株的EMT相关上皮细胞标志蛋白和间质细胞标志蛋白的表达情况,RT-qPCR检测miRNA-138的表达情况。2、予携带cy3荧光片段的miRNA-138 mimic转染TC-1细胞株,荧光显微镜观察转染效率,RT-qPCR检测miRNA-138的表达。同时给予TGF-β1刺激转染miRNA-138的TC-1细胞,Western Blot检测EMT相关上皮细胞标志蛋白和间质细胞标志蛋白变化情况。研究结果1、予20ng/ml的TGF-β1刺激TC-1细胞后,相比于正常对照组,上皮细胞表型蛋白E-cadherin表达减弱,间质细胞表型蛋白vimentin、α-SMA、collagen-Ⅰ表达增强;提示TGF-β1可以诱导上皮细胞发生EMT。2、予10ng/ml的TGF-β1刺激TC-1细胞24h后,miRNA-138表达较正常对照组减弱;提示miRNA-138在气道上皮细胞发生EMT过程中表达受到抑制。3、TC-1转染miRNA-138 mimic后miRNA-138表达上调。给予TGF-β1刺激并转染miRNA-138组上皮细胞表型蛋白E-cadherin和间质细胞表型蛋白vimentin、α-SMA、collagen-Ⅰ与未给予TGF-β1刺激的正常对照组表达无显著差异。结论1、在TGF-β1的刺激下,气道上皮细胞可以通过EMT转变为成间质细胞,如成纤维细胞和(或)肌成纤维细胞,且伴随miRNA-138表达下调。2、MiRNA-138过表达可以抑制TGF-β1诱导的气道上皮细胞发生EMT,为哮喘气道重塑机制和防治研究提供思路。
【关键词】：上皮间质转分化(EMT) miRNA 哮喘 气道重塑
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 英文缩略语表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 TGF-β1诱导小鼠气道上皮细胞株TC-1发生上皮-间质细胞转分化13-23
• 2.1 实验材料、方法13-20
• 2.2 结果20-22
• 2.3 讨论22
• 2.4 小结22-23
• 第三章 MiRNA-138过表达以抑制TGF-β1诱导的EMT23-38
• 3.1 实验材料、方法23-33
• 3.2 结果33-37
• 3.3 讨论37
• 3.4 小结37-38
• 全文结论38-39
• 参考文献39-45
• 参考综述 上皮-间质细胞转分化与气道重塑相关研究进展45-58
• 参考文献51-58
• 攻读硕士期间发表的文章58-59
• 致谢59

【参考文献】

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1 王春梅;李庆章;;microRNA在小鼠乳腺不同发育时期差异表达谱及作用(英文)[J];遗传学报;2007年11期

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本文编号：790913