雷公藤对STZ诱导的1型糖尿病小鼠的疗效研究

发布时间：2017-09-10 03:16

  本文关键词：雷公藤对STZ诱导的1型糖尿病小鼠的疗效研究

  更多相关文章： 雷公藤 1型糖尿病 胰岛β细胞 血糖 胰岛素 胰岛素自身抗体

【摘要】：研究背景1型糖尿病(Type1 diabetes mellitus,T1DM),又称自身免疫性糖尿病,旧称青少年型糖尿病。现已少用此类称呼,因为过去我们对糖尿病的认识不足,常常将T1DM定位于儿童或青少年。T1DM患者大约占糖尿病病人总数的10%左右,根据2015年,国际糖尿病联合会(IDF)发布的调查数据,全世界约有54万2千个儿童患有1型糖尿病。糖尿病的主要危害是长期的高血糖所引起的血管及脏器损伤,造成患者患有一种或几种糖尿病的慢性并发症。常见的如心血管疾病[1]、糖尿病肾病[2]等,严重影响患者的生活质量甚至最终导致死亡[3]。与2型糖尿病的发病机制相比,T1DM的有很大的不同,根本上是由于自身免疫性疾病所导致。机制可能是由于自身免疫系统破坏了产生胰岛素的胰岛β细胞而引起,主要特点为胰岛素分泌的缺失,因此患者必须注射胰岛素,并且依赖终身。β细胞是胰岛细胞的重要构成部分,约占胰岛细胞的近80%。某些病毒会(如腮腺炎病毒、柯萨奇B4病毒或风疹病毒等)侵犯感染胰岛细胞,有些毒性化学物质(如吡甲硝苯脲,链脲佐菌素,四氧嘧啶等)也会对胰岛β细胞损伤,造成自身非免疫性损伤,或者因β细胞的破坏,释放出一些致敏蛋白从而引起自身免疫性的损伤(其中包括细胞免疫和体液免疫的共同参与),引发胰岛的自身免疫性炎症损伤和凋亡,导致胰岛β细胞的严重破坏。其中链脲佐菌素(STZ)是一项技术非常成熟的动物糖尿病模型建造试剂,对胰岛β细胞具有特异性的毒性杀伤作用[4]。多次中等剂量的注射的方法可以使啮齿类动物的β细胞大量较长时间的破坏,持续胰岛炎症反应,与人的T1DM发病过程较类似[5]。免疫抑制剂用于结缔组织病和自身免疫病等的治疗。雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook F)又名黄藤,是我国传统中草药。卫矛科雷公藤属植物,具有活血化瘀、清热解毒、消肿散结等功效[6],还具有抗炎、治疗神经性退化疾病等多种药理活性[7]。近年来在糖尿病肾病的领域中已有使用雷公藤制剂治疗的相关临床研究经验分享报告[8]。针对国内应用雷公藤多苷治疗糖尿病肾病的荟萃分析显示[9],雷公藤多苷能减少糖尿病肾病患者尿中的白蛋白含量,而对血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)则无明显影响。另有文献报道,雷公藤另一种活性成分:雷公藤甲素,可以通过激活凋亡蛋白酶Caspases,从而诱导外周t细胞的凋亡,而对胸腺细胞不产生影响[10]。另有研究发现,其还能有效地通过激活Caspase-3,而诱导有抗原提呈作用的树突状细胞(DC)凋亡[11]等从而起到抑制细胞免疫反应。对体液免疫的影响方面,Jianan Ren等研究表明雷公藤多苷可以有效使血清中的C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)明显减少[12]。杨帆等人研究发现雷公藤制剂能够通过抑制巨噬细胞产生白细胞介素-6(IL-6),而减轻炎症反应[13]。目的探讨雷公藤对STZ损伤的β细胞功能的影响。方法1.建立1型糖尿病小鼠实验模型健康8周龄C57BL/6小鼠在适应性喂养一周后进行随机分组。除对照组,STZ组和STZ+雷公藤组小鼠均进行STZ的注射造模。2.STZ+雷公藤组小鼠进行灌胃实验。STZ+雷公藤组每日上午9点行雷公藤药物灌胃治疗,其余两组行生理盐水灌胃做对照实验。3.小鼠的喂养、卫生监管及体重血糖等指标检测。每天检查小鼠的生活环境状况,如精神状态、饮食情况、运动程度、皮毛光泽等。并每周监测血糖、体重、饮食量等。实验结束时处死小鼠,分别收集血液和组织材料,妥善固定及冷冻。4.组织形态学观察将胰腺组织进行石蜡切片后经苏木精—伊红染色(Hematoxylin-eosin,HE)染色,在显微镜下观察胰岛细胞变化情况。5.用ELISA检测INS,IAA水平血液离心后,检测小鼠血浆上清液中胰岛素(INS)及胰岛素自身抗体(IAA)水平情况。结果1.与对照组小鼠相比,STZ组小鼠的体重明显减轻。2.经过6周的雷公藤灌胃治疗后,口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)测定血糖曲线下面积(area under the cure,AUC)显示,与STZ组相比,STZ+雷公藤组小鼠糖耐量明显改善。3.与对照组小鼠相比,STZ组INS明显减少,STZ+雷公藤组INS水平高于STZ组,而STZ+雷公藤组IAA水平低于STZ组。4.HE染色显示,对照组胰岛细胞致密,排列有序,间隙小,胞质核仁饱满。STZ组胰岛皱缩,细胞排列紊乱有空泡,核致密,胞浆少。STZ+雷公藤组胰岛虽未有皱缩,但胰岛细胞较排列紊乱,存在空泡,细胞较稀疏。结论雷公藤对STZ诱导的1型糖尿病小鼠的胰岛细胞具有一定的保护作用,能使小鼠胰岛素自身抗体减少,减轻了自身免疫反应,从而使β细胞的破坏程度有所缓解,恢复β细胞分泌胰岛素的部分功能。
【关键词】：雷公藤 1型糖尿病 胰岛β细胞 血糖 胰岛素 胰岛素自身抗体
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.1
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-12
• 英文缩略表（ABBREVIATION）12-14
• 前言14-18
• 1 材料与方法18-34
• 1.1 实验动物18
• 1.2 动物饲料18
• 1.3 实验试剂18-21
• 1.4 主要仪器设备21-22
• 1.5 实验方法22-32
• 1.5.1 适应性喂养，，分组及小鼠同质基础确定23-25
• 1.5.2 建造1型糖尿病小鼠模型25-26
• 1.5.3 雷公藤组的小鼠雷公藤灌胃治疗26
• 1.5.4 小鼠麻醉26
• 1.5.5 小鼠取血26-27
• 1.5.6 小鼠组织取材27
• 1.5.7 提取血浆备用27
• 1.5.8 胰腺组织的石蜡切片制备27-28
• 1.5.9 HE染色28-29
• 1.5.10 小鼠胰岛素酶联免疫吸附测定实验（Mouse INS ELISA Test）29-31
• 1.5.11 小鼠胰岛素自身抗体酶联免疫吸附测定实验（Mouse IAA ELISA Test）31-32
• 1.6 统计学处理方法32-34
• 2 结果34-44
• 2.1 小鼠饲养过程中，生存状况观察34
• 2.2 STZ组小鼠体重减轻34-35
• 2.3 胰岛素耐量实验验证各组的同质基础35-36
• 2.4 雷公藤对STZ造模的糖尿病小鼠有一定的降低血糖作用36
• 2.5 口服葡萄糖耐量实验（OGTT）验证各组的同质基础36-37
• 2.6 第6周后的OGTT实验表明雷公藤对STZ诱导的小鼠高血糖有改善作用37-39
• 2.7 雷公藤恢复β细胞分泌胰岛素的部分功能39-40
• 2.8 雷公藤降低了STZ诱导小鼠的胰岛素自身抗体（IAA）水平40-41
• 2.9 雷公藤改善了胰岛细胞变性损伤结构41-44
• 3 讨论44-48
• 4 结论48-50
• 参考文献50-54
• 文献综述 1 型糖尿病的相关研究54-64
• 参考文献60-64
• 致谢64-65

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 苏维广,孟江;雷公藤的临床应用[J];辽宁中医杂志;2003年10期

2 李中华,张振家,孙卫红;雷公藤的临床应用[J];医药导报;2003年S1期

3 陈成威 ,何悦仪;雷公藤多苷治疗小儿乙型肝炎病毒相关肾炎12例疗效观察[J];新医学;2005年05期

4 毛庆秋,黄真;雷公藤多苷的临床应用进展[J];时珍国医国药;2005年05期

5 景晓平;丁樱;任献青;李向峰;;雷公藤多苷对小儿生殖安全性评价研究的思考[J];时珍国医国药;2009年01期

6 林燕;窦一田;杨洪涛;;雷公藤多苷治疗原发性肾病综合征的回顾性研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2011年10期

7 张金梅;;雷公藤几种疗效的临床分析[J];内蒙古中医药;2012年14期

8 张俊贞;;雷公藤多苷治疗儿童紫癜性肾炎的研究进展[J];中国药房;2012年48期

9 唐贞力;雷公藤临床应用新进展[J];中医药研究;1998年06期

10 吕必华,张玲,蒋巧俐;雷公藤多苷的药理研究与临床应用[J];中国医院药学杂志;2001年07期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 龚宁波;张丽娟;;雷公藤多苷的临床用途概述[A];第四次全国雷公藤学术会议论文汇编[C];2004年

2 于艳秋;张海鹏;杜烨玮;段忠辉;;雷公藤多苷对急性移植物抗宿主病的作用及其机制的研究[A];第四次全国雷公藤学术会议论文汇编[C];2004年

3 丁樱;崔瑞琴;;雷公藤多苷对雌性幼鼠生育力的影响[A];2008年全国中西医结合肾脏病南京论坛论文汇编[C];2008年

4 吴念祖;;雷公藤在眼科的应用[A];第五届全国雷公藤学术会议论文汇编[C];2008年

5 李波;;雷公藤的临床应用及毒性作用[A];第五届全国雷公藤学术会议论文汇编[C];2008年

6 刘继勇;杨帝顺;尤本明;王峥涛;陈凯先;;雷公藤多苷纳米凝胶的构建及体内药代动力学研究[A];2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周论文集[C];2013年

7 任献青;丁樱;崔瑞琴;;菟丝子黄酮干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠睾丸组织损伤的实验研究[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年

8 林宗明;杨春欣;张永康;王国民;许迅辉;吕迁洲;任豫申;董颖;;去甲泽拉木醛与雷公藤多苷免疫抑制比较研究[A];第四次全国雷公藤学术会议论文汇编[C];2004年

9 丁樱;崔瑞琴;;雷公藤多苷对雌性幼鼠雌激素及其受体表达的影响[A];药用植物化学与中药有效成分分析研讨会论文集（上）[C];2008年

10 刘继勇;杨帝顺;尤本明;朱全刚;胡晋红;王峥涛;;雷公藤多苷纳米乳的制备及体外透皮特性研究[A];第四届全国药学服务与研究学术论坛论文集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前3条

1 董兴刚；安增梅;雷公藤治疗蛋白尿廿年[N];中国医药报;2004年

2 曲政海;小剂量雷公藤多苷可治疗Still病[N];中国医药报;2004年

3 莫惠平 潘秋荣 谭柳群;雷公藤多苷的不良反应及防治[N];中国医药报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前9条

1 高丽;中药复方含药血清对雷公藤致骨髓细胞凋亡的保护作用及其机制研究[D];湖北中医药大学;2011年

2 李大可;解毒饮防治雷公藤所致药物性肝损害作用机制的实验研究[D];山东中医药大学;2008年

3 倪张俊;雷公藤致大鼠药源性卵巢功能耗损模型建构与补肾法干预研究[D];广州中医药大学;2013年

4 杨学文;雷公藤多苷治疗RA的抗血管生成作用及机理研究[D];南京中医药大学;2010年

5 曹俊岩;雷公藤多苷致大鼠卵泡发育障碍模型的中医证候属性研究[D];成都中医药大学;2011年

6 王妍;雷公藤与甲氨蝶呤、黄芪与当归联用治疗RA机制的生物信息学分析[D];中国中医科学院;2012年

7 任献青;补肾中药及提取物干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠生殖损伤的实验研究[D];北京中医药大学;2008年

8 付雨;雷公藤多苷致大鼠卵巢功能低下模型的病理机制与中医证候属性研究[D];成都中医药大学;2010年

9 柴智;逍遥散对雷公藤致大鼠肝毒性的保护作用及其机制研究[D];湖北中医药大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张贺;新风胶囊中雷公藤配伍减毒作用研究[D];安徽中医药大学;2015年

2 翟金晓;雷公藤、夹竹桃及常见有毒生物碱的中毒、检测及评价研究[D];苏州大学;2015年

3 陈秋杰;雷公藤对ITP患者T细胞亚群IDO与TTS表达的影响[D];广州中医药大学;2015年

4 赵阳春;探讨曲普瑞林、六子方对雷公藤多苷致卵巢功能受损的保护机制[D];浙江中医药大学;2015年

5 赵瑞萍;甘露糖结合凝集素及炎症因子在糖尿病模型大鼠肾组织的表达及雷公藤多苷对其干预研究[D];蚌埠医学院;2015年

6 王石秀;雷公藤多苷壳聚糖微球的制备及其对小鼠实验性结肠炎作用的研究[D];南昌大学医学院;2015年

7 廉信;雷公藤多苷对特应性皮炎患者细胞因子表达影响的研究[D];天津医科大学;2008年

8 李冠炜;雷公藤多苷上调克罗恩病病人局部肠粘膜Treg细胞及调节炎症因子的分泌[D];南京大学;2014年

9 刘伙亮;雷公藤治疗特发性膜性肾病的系统评价[D];广州中医药大学;2016年

10 夏莎;雷公藤多苷及其与白芍总苷配伍对成骨细胞MC3T3-E1增殖、周期、凋亡及相关蛋白表达的影响[D];南京中医药大学;2016年

本文编号：824406