GLP-1受体激动剂Exendin-4对min6细胞GSIS的保护作用及MAPK信号通路的作用

发布时间：2017-09-18 21:49

  本文关键词：GLP-1受体激动剂Exendin-4对min6细胞GSIS的保护作用及MAPK信号通路的作用

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【摘要】：目的了解干扰素1β对min6系在高糖下胰岛素合成(GSIS)得影响,Exendin-4影响下min6细胞胰岛素分泌变化,及促分裂素原活化蛋白激酶MAPK(ERK1/2,p38,JNK)信号通路磷酸化程度的改变。方法(1) MIN6细胞分别在不同浓度葡萄糖(0、5.5、11.1、22.2mmol/1)的K RBH缓冲液中孵育1h,收集培养的上清液,用酶免法测定其胰岛素浓度,提取细胞总蛋白,用蛋白质免疫印迹法测定MAPK(ERK1/2,P38,JNK)信号通路磷酸化水平。(2)MIN6 细胞分别在不同浓度的IL-1β(0、0.25、2.5ng/ml)培养液中培养24小时,在高糖KRBH培养一个小时,收集细胞培养后的上清液,酶免法测定胰岛素浓度,在高糖KRBH下培育5min,收集细胞总蛋白,蛋白质免疫印迹法测定ERK1/2、P38、JNK的磷酸化水平。(3)MIN6细胞0.25ng/ml的IL-1β培养液中培养24h同时加入不同浓度的的胰高糖素样肽-1的受体激动剂Exendin-4(50、500pmol/ml),在高糖的KRBH培养一小时,收集培养上清液,酶免法测定胰岛素浓度,收集细胞总蛋白蛋白质免疫印迹法测定磷酸化的促分裂素原活化蛋白激酶(ERK1/2,P38,JNK)的磷酸化水平。结果(1)IL-1 β抑制了min6细胞胰岛素的分泌,下调了ERK1/2磷酸化水平,提高了JNK和p38磷酸化水平。(2)Exendin-4对IL-1β损伤min6细胞胰岛素分泌作用中起了保护作用,提高了ERK1/2的磷酸化活化程度,降低了p38的磷酸化活化程度。结论Exendin-4对胰岛素分泌有保护作用,机制与MAPK信号通路相关。
【关键词】：促分裂素原活化蛋白激酶 MIN6细胞 GSIS 糖尿病
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.1
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-8
• 缩略词8-11
• 第一章 绪论11-19
• 1.1 糖尿病的概述11-12
• 1.2 糖尿病的致病机理与治疗12
• 1.3 MAPK信号通路与糖尿病的关系12-16
• 1.3.1 ERK1/2信号通路13-14
• 1.3.2 P38信号通路14-15
• 1.3.3 JNK信号通路15-16
• 1.4 炎性细胞因子和糖尿病发病机制的关系16-17
• 1.5 GLP-1对胰岛β细胞的保护机制17-19
• 第二章 正文19-53
• 2.1 材料与方法19-25
• 2.1.1 细胞来源19
• 2.1.2 主要的试剂19-21
• 2.1.3 主要的仪器21-23
• 2.1.4 主要试剂配制23-24
• 2.1.5 研究方案24-25
• 2.2 研究方法25-42
• 2.2.1 min6细胞的培养25-27
• 2.2.2 Min6细胞的胰岛素分泌反应(GSIS)27-29
• 2.2.3 酶免分析药盒测定胰岛素浓度29
• 2.2.4 min6细胞MAPK信号通路的变化29-31
• 2.2.5 Western Blotting蛋白质免疫印迹分析31-34
• 2.2.6 min6细胞胰岛素基因表达34-36
• 2.2.7 min6细胞RNA总提取36-38
• 2.2.8 RNA的质量检测38
• 2.2.9 cDNA的合成38-39
• 2.2.10 引物设计39-40
• 2.2.11 荧光定量40-42
• 2.3 实验结果与分析42-53
• 2.3.1 min6细胞形态学分析42-44
• 2.3.2 不同糖浓度刺激下min6细胞的GSIS44-45
• 2.3.3 IL-1β对min6细胞GSIS的损伤45-46
• 2.3.4 exendin-4对min6细胞GSIS保护作用46-47
• 2.3.5 不同糖浓度刺激对min6细胞MAPK信号通路影响47-48
• 2.3.6 IL-1β对min6细胞MAPK信号通路影响48-50
• 2.3.7 exendin-4对min6细胞MAPK信号通路影响50-51
• 2.3.8 胰岛素基因的表达51-53
• 第三章 结论和讨论53-59
• 3.1 讨论53-57
• 3.1.1 不同糖浓度刺激结果分析讨论53-54
• 3.1.2 IL-β刺激min6细胞结果讨论54-55
• 3.1.3 Exendin-4对min6细胞的影响55-56
• 3.1.4 不同葡萄糖对min6细胞胰岛素基因表达影响结果分析56-57
• 3.1.5 展望与未来57
• 3.2 结论57-59
• 致谢59-60
• 参考文献60-71
• 附录71

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本文编号：877716