3-甲基腺嘌呤对急进高原大鼠肠上皮细胞损伤自噬影响的研究

发布时间：2017-09-19 02:12

  本文关键词：3-甲基腺嘌呤对急进高原大鼠肠上皮细胞损伤自噬影响的研究

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【摘要】：目的:探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对急进高原缺氧大鼠肠上皮细胞自噬水平及损伤程度的影响。方法:以体重在180-280克,年龄在6-9周的50只健康雄性Wister大鼠作为研究对象,随机分成:A组(对照组),B组(急进高原缺氧24h组),C组(急进高原缺氧24h 3-MA组),D组(急进高原缺氧48h组),E组(急进高原缺氧48h 3-MA组)。除A组外,其余4组在海拔高度5000 m低压氧舱环境下建立急进高原缺氧大鼠肠上皮细胞损伤模型,预先筛选出自噬抑制剂3-MA的最佳作用浓度,并于模型建立前半小时给予C组、E组腹腔注射该浓度的3-MA(20mg/kg,溶于1ml生理盐水中),同时给予A组、B组、D组腹腔注射1ml 0.9%生理盐水,肉眼观察各组大鼠的行为学改变,HE染色分析大鼠肠组织的损伤程度,透射电镜观察自噬体结构的表达,免疫组织化学方法检测自噬相关蛋白(LC-3、Beclin-1)的表达,RT-PCR方法检测(LC-3、Beclin-1)mRNA的表达情况。结果:(1)3-MA在浓度为20 mg/kg具有明显的肠上皮细胞自噬抑制作用;(2)肠组织病理损伤级别评分示:A组大鼠肠组织基本正常(肠道病理损伤级别得分为1.1±0.3);与A组相比,B-E组大鼠肠组织均有不同程度的病理性损伤(肠道病理损伤级别得分分别为3.1±0.6、4.5±0.5、2.6±0.5、3.8±0.4),且差异显著(P0.05);3-MA组(C、E组)较模型组(B、D组)肠组织的病理性损伤级别明显增加(P0.01);(3)透射电镜下可见:模型组(B、D组)肠上皮细胞均可见自噬体结构,而3-MA组(C、E组)自噬体这种双层膜结构小体的数量则相对明显减少;(4)RT-PCR及免疫组化结果提示:与平原组相比,模型组LC-3、Beclin-1自噬相关蛋白及mRNA表达均明显上调(P0.05);而与模型组相比,3-MA组LC-3、Beclin-1蛋白和mRN A表达均显著降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论:(1)3-MA可加重急进高原缺氧肠上皮细胞损伤,原因之一可能与其明显降低细胞自噬水平有关;(2)细胞自噬可能是急进高原缺氧肠上皮细胞损伤过程中的保护因素。
【关键词】：高原 肠上皮细胞 缺氧 自噬 3-甲基腺嘌呤
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R594.3
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 缩略词表7-11
• 前言11-17
• 一、材料与方法17-24
• 1.1 材料17-18
• 1.1.1 实验动物17
• 1.1.2 主要实验试剂及药品17
• 1.1.3 仪器17-18
• 1.2 方法18-24
• 1.2.1 实验动物分组18
• 1.2.2 模型建立及给药18-19
• 1.2.3 待测肠组织收集19
• 1.2.4 行为学观察19
• 1.2.5 肠组织HE染色19-20
• 1.2.6 采用SABC方法进行免疫组化20-21
• 1.2.7 透射电镜检测自噬体结构21
• 1.2.8 RT-PCR方法检测LC3、Beclin-1 基因的表达21-23
• 1.2.9 统计学分析23-24
• 二、结果24-30
• 2.1 行为学改变24
• 2.2 肠组织病理学改变24-26
• 2.3 免疫组化结果26-28
• 2.4 自噬体结构观察28
• 2.5 RT-PCR结果28-30
• 三、讨论30-33
• 四、结论33
• 五、不足与展望33-34
• 参考文献34-39
• 附：综述39-48
• 参考文献45-48
• 在学期间的研究成果48-49
• 致谢49

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本文编号：878873