沙棘籽蛋白对2型糖尿病模型小鼠体内降血糖与炎症因子的干预作用

发布时间：2017-09-30 16:23

  本文关键词：沙棘籽蛋白对2型糖尿病模型小鼠体内降血糖与炎症因子的干预作用

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【摘要】：沙棘(Hippohae rhamnoides L.)是一种天然的药食同源性植物,属于胡秃子科(Elaeagnaceae)沙棘属(Hippophae),沙棘的根、茎、叶、花、果实均含有丰富的营养和生物活性物质。此外,沙棘籽蛋白质含量丰富,是一种很好的植物蛋白资源。沙棘资源广泛分布于欧亚地区,我国是沙棘资源最丰富的国家,主要分布于西南、西北和华北等地。本文以沙棘籽为原料,采用石油醚脱脂、乙醇去黄酮与原花青素,碱提酸沉的方法制备沙棘籽蛋白,同时研究了沙棘籽蛋白对糖尿病小鼠的降血糖作用、对炎症因子的干预作用以及对相关基因表达的影响,并对其功效、机制进行了探索,为沙棘籽蛋白产品的开发利用提供理论依据。本研究以沙棘籽为原料制备沙棘籽蛋白,蛋白质全自动测定仪测定沙棘籽蛋白含量及其得率。氨基酸全自动分析仪测定沙棘籽蛋白氨基酸成分。利用高脂饮食结合化学试剂诱导得到2型糖尿病小鼠实验模型,以沙棘籽蛋白、沙棘多糖和沙棘原花青素进行灌胃处理4周,研究其对糖尿病小鼠体重(BW)、空腹血糖(FBG)、血脂、血清胰岛素(SIN)的影响以及对糖尿病小鼠胰岛素抵抗的改善作用；用酶联免疫双抗体夹心法检测小鼠血清C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-a (TNF-α)核因子-κB (NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)水平,检测小鼠肝脏AMP激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)、沉默信息调节因子1 (Silent information regulator 1, Sirtl)活性；用半定量RT-PCR (sqRT-PCR)的方法研究沙棘籽蛋白对糖尿病小鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase, G-6-P),糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β)、肉碱棕榈酰基转移酶-1(carnitine palmitoyl transferase 1-α, CPT1-a)、糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase, GP)基因表达的影响。结果显示,采用碱提酸沉的方法制备沙棘籽蛋白的含量为70.1%,总提取率为36.5%,氨基酸种类齐全,必需氨基酸组成比例均匀。动物实验结果显示,沙棘籽蛋白、沙棘多糖和沙棘原花青素处理组小鼠空腹血糖、总甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均显著低于模型组(p0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胰岛素敏感指数显著高于模型组(p0.05),血清胰岛素水平和胰岛素抵抗指数(IRI)显著低于模型组(p0.05)；沙棘籽蛋白、沙棘多糖和沙棘原花青素处理组小鼠血清炎症因子水平均显著低于模型组(p0.05),小鼠肝脏AMPK、 Sirtl活性均显著高于模型组(p0.05)。各组小鼠RT-PCR结果显示,沙棘籽蛋白、沙棘多糖和沙棘原花青素各剂量组G-6-P, GSK-3β, CPT1-α和GP mRNA表达水平均低于模型组。本研究结果表明,沙棘籽蛋白具有降低2型糖尿病小鼠的体重的功效,具有改善小鼠高血脂和高血糖症状的功效。Elisa实验证明,沙棘籽蛋白能够改善2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗及炎症因子水平,提高AMPK、Sirt1活性的功效.sqRT-PCR结果显示沙棘籽蛋白能够抑制G-6-P、GsK-3β、cPT1-α和GP等基因的表达。其作用机制可能与增强AMPK、Sirt1活性,抑制G-6-P、GsK-3β、cPT1-α和GP等基因表达有关。说明沙棘籽蛋白能够有效预防和控制2型糖尿病的发生。
【关键词】：糖尿病 沙棘 降血糖 抗炎
【学位授予单位】：合肥工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：TS201.21;R587.1
【目录】：

• 致谢7-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-17
• 第一章 绪论17-24
• 1.1 糖尿病研究进展、现状、成果17-18
• 1.2 沙棘简介18-21
• 1.2.1 沙棘籽蛋白简介及研究进展19-20
• 1.2.2 沙棘多糖简介及研究进展20
• 1.2.3 沙棘原花青素简介及研究进展20-21
• 1.3 糖尿病与炎症反应的关系21
• 1.4 糖尿病与相关酶活性的关系21-22
• 1.5 本课题研究的目的及意义22-24
• 第二章 沙棘籽蛋白的制备、含量测定及成分分析24-32
• 2.1 材料与仪器24-25
• 2.1.1 实验材料24
• 2.1.2 主要试剂24
• 2.1.3 主要仪器24-25
• 2.2 实验方法25-28
• 2.2.1 沙棘籽蛋白质制备25
• 2.2.2 沙棘籽蛋白含量测定25-26
• 2.2.3 沙棘籽蛋白氨基酸测定方法26-27
• 2.2.4 沙棘籽蛋白黄酮含量测定27
• 2.2.5 沙棘籽蛋白原花青素含量测定27-28
• 2.2.6 结果处理28
• 2.3 结果与分析28-30
• 2.3.1 沙棘籽蛋白含量及成品中蛋白质量分数计算与分析28
• 2.3.2 沙棘籽蛋白氨基酸测定结果28-29
• 2.3.3 沙棘籽蛋白原花青素含量测定29-30
• 2.3.4 沙棘籽蛋白原花青素含量测定30
• 2.4 本章小结30-32
• 第三章 沙棘籽蛋白对2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗及血脂的影响32-46
• 3.1 材料与仪器32-33
• 3.1.1 实验动物与材料32
• 3.1.2 主要试剂32
• 3.1.3 主要仪器32-33
• 3.1.4 实验器具33
• 3.2 实验方法33-39
• 3.2.1 2型糖尿病模型的建立33
• 3.2.2 成模小鼠分组及灌胃处理方案33-34
• 3.2.3 小鼠体重和空腹血糖测定34
• 3.2.4 小鼠血清和脏器采集34-35
• 3.2.5 胰岛素抵抗相关指标测定35
• 3.2.6 小鼠血脂测定35-39
• 3.2.7 数据处理39
• 3.3 实验结果与分析39-44
• 3.3.1 SSP对糖尿病小鼠体重的影响39-40
• 3.3.2 SSP、SPR、SPO对糖尿病小鼠血糖的影响40-41
• 3.3.3 处理后实验小鼠胰岛素抵抗指标41-42
• 3.3.4 SSP、SPR、SPO对糖尿病小鼠脏器指数的影响42-43
• 3.3.5 SSP、SPR和SPO对糖尿病小鼠血脂水平影响43-44
• 3.4 本章小结44-46
• 第四章 沙棘籽蛋白对2型糖尿病模型小鼠炎症因子的干预作用及相关基因表达的影响46-59
• 4.1 材料与仪器46-47
• 4.1.1 材料46
• 4.1.2 主要仪器46
• 4.1.3 主要试剂46-47
• 4.2 实验方法47-50
• 4.2.1 小鼠血清C反应蛋白含量测定47
• 4.2.2 小鼠血清IL-6含量测定47
• 4.2.3 小鼠血清TNF-α含量测定47-48
• 4.2.4 小鼠血清NF-κB含量测定48
• 4.2.5 小鼠肝脏组织AMPK活性测定48
• 4.2.6 小鼠肝脏组织SIRT1活性测定48-49
• 4.2.7 基因引物序列设计49
• 4.2.8 肝脏组织总RNA提取49
• 4.2.9 cDNA合成49-50
• 4.2.10 RT-PCR50
• 4.2.11 琼脂糖凝胶电泳50
• 4.2.12 数据处理50
• 4.3 结果与分析50-57
• 4.3.1 SSP对糖尿病小鼠血清CRP因子水平的影响50-51
• 4.3.2 SSP对糖尿病小鼠血清IL-6因子水平的影响51-52
• 4.3.3 SSP对糖尿病小鼠血清TNF-α因子水平的影响52-53
• 4.3.4 SSP对糖尿病小鼠血清NF-κB因子水平的影响53-54
• 4.3.5 SSP对糖尿病小鼠肝脏组织AMPK水平的影响54-55
• 4.3.6 SSP对糖尿病小鼠肝脏组织SIRT1水平的影响55-56
• 4.3.7 SSP对糖尿病小鼠肝脏相关基因表达的影响56-57
• 4.4 本章小结57-59
• 第五章 结论与展望59-60
• 5.1 结论59
• 5.1.1 沙棘籽蛋白的制备方法59
• 5.1.2 SSP降血糖、降血脂及对血清炎症因子的影响59
• 5.1.3 SSP对糖尿病小鼠肝脏相关蛋白活性及基因表达的影响59
• 5.2 展望59-60
• 参考文献60-67
• 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况67

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本文编号：949224