Parkin介导的线粒体自噬在棕榈酸钠诱导下肾小管损伤中的作用

发布时间：2017-10-05 21:44

  本文关键词：Parkin介导的线粒体自噬在棕榈酸钠诱导下肾小管损伤中的作用

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【摘要】：目的:探讨脂肪酸介导的肾小管损伤的潜在机制——Parkin介导的线粒体自噬。方法:(1)人体实验实验组:早期慢性肾脏病合并高脂血症患者肾脏标本。病理类型:膜性肾病、IgA肾病。对照组:因外伤手术需切除部分肾脏(无基础肾脏疾病及不伴高脂血症)的患者肾脏组织。肾脏组织中Parkin、Beclin1及LC3蛋白表达水平采用免疫组化和免疫荧光染色方法。(2)动物实验随机分配20只雄性SD大鼠为两组:正常对照组(n=10),普通饲料喂养;高脂组(n=10),高脂饲料喂养。12周后检测血清胆固醇、甘油三酯水平。采用免疫组化、免疫荧光及Western blot技术检测Parkin、LC3II/I、Beclin1等蛋白表达。(3)细胞实验体外培养人肾小管上皮细胞(human proximal tubular epithelial cell line,HK-2),采用慢病毒GFP-LC3(MOI=60)转染HK-2细胞,使HK-2细胞株稳定表达GFP-LC3,用棕榈酸钠(一种饱和的脂肪酸)刺激hk-2,采用westernblot及细胞免疫荧光技术来检测parkin、beclin1及lc3在hk-2细胞内的表达;采用mdc检测细胞内酸性液泡;采用dcfh-da染色检测细胞内ros水平;jc-1技术用于检测hk-2细胞内线粒体膜电位;采用线粒体示踪剂(mitochondriatracer)检测细胞内线粒体形态;采用tunel检测凋亡水平。转染si-parkin敲低hk-2细胞内parkin表达,观察pa处理下hk-2细胞内线粒体膜电位,慢病毒gfp-lc3与线粒体共定位以及细胞凋亡水平。采用氧自由基清除剂tempol预处理hk-2,检测棕榈酸钠处理组或未处理组细胞内凋亡水平。数据结果以均数±标准差(x±s)表示,数据采用spss21.0软件处理,两组资料比较采用t检验,多组资料比较采用单因素方差分析,p值0.05为差异有统计学意义。结果:(1)早期慢性肾脏病合并高脂血症(chronickidneydisease,ckd)患者肾脏parkin、beclin1及lc3蛋白表达较因外伤无肾脏基础疾病无高脂血症的对照组患者肾脏中表达明显增高。(2)高脂喂养组大鼠肾脏parkin、beclin1及lc3的表达较正常饮食组明显增高(p0.05)。(3)高脂喂养组血清胆固醇、甘油三酯表达水平较正常饮食组明显增加(p0.05)。(4)pa诱导下hk-2细胞内parkin、beclin1及lc3的表达呈剂量依赖性增加,mdc水平、ros及细胞凋亡较对照组明显增加,线粒体膜电位下降,gfp-lc3和parkin的共定位增加,gfp-lc3和线粒体共定位增加,线粒体和parkin的共定位增加。(5)敲低parkin表达水平,pa诱导下hk-2细胞内gfp-lc3与线粒体共定位、线粒体膜电位较未敲低组减少,ROS水平及细胞凋亡较siParkin未转染组明显增加。(6)采用氧自由基清除剂Tempol抑制细胞内活性氧的堆积,能缓解棕榈酸钠诱导的HK-2细胞的凋亡。结论:线粒体自噬通过调节氧化应激通路,减轻高脂诱导的肾小管上皮细胞凋亡。
【关键词】：Parkin 线粒体自噬 凋亡 氧化应激 棕榈酸钠
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692;R589.2
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-5
• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 1 材料、试剂和仪器13-16
• 2 实验方法16-23
• 3 结果23-32
• 4 讨论32-35
• 全文总结35-36
• 参考文献36-40
• 文献综述40-50
• 参考文献45-50
• 致谢50-51
• 攻读硕士学位期间发表的论文51

【参考文献】

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1 Jessica A Williams;Sharon Manley;Wen-Xing Ding;;New advances in molecular mechanisms and emerging therapeutic targets in alcoholic liver diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2014年36期

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本文编号：978997