不同日龄长白猪胰岛分离和纯化的比较研究

发布时间：2017-10-07 04:10

  本文关键词：不同日龄长白猪胰岛分离和纯化的比较研究

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【摘要】：胰岛移植是治疗Ⅰ型糖尿病的最有效方法之一。为解决胰岛来源不足,进行异种间胰岛移植的研究是治疗Ⅰ型糖尿病的研究热点,而猪胰岛被认为是人类胰岛供体的最佳来源。本试验为探讨不同日龄猪胰腺胰岛分离纯化技术,以出生1d、60 d、120 d、165-180 d猪为试验动物,采用胰管注射法、histopaque纯化法、酶联免疫吸附试验及组织学、免疫组织化学技术等进行胰腺胰岛的分离纯化试验。结果表明,猪胰腺胰岛获取量与不同胶原酶消化时间0 min、15 min、30 min和45 min各组间均差异显著(P0.05)；胰岛获取量与不同浓度胶原酶1.0 mg/ml、1.5 mg/ml、2.0 mg/ml各组间均差异显著(P0.05)；在相同的消化时间(15 min)条件下,1d和60 d采取胶原酶浓度为1.0 mg/ml,120 d和165-180 d胶原酶浓度为1.5 mg/ml条件下分离纯化,1d猪胰岛分离3045±986个／g,纯化后2421±438个／g,纯化度为78%,存活率为92%；60 d猪胰岛分离2567±873个／g,纯化后1938±362个/g,纯度为74%,存活率94%；120 d龄猪胰岛分离1969±547个/g,纯化后1562±236个/g,纯度为79%,存活率90%；165-180 d龄猪胰岛分离1758±125个/g,纯化后1485±119个/g,纯度为84%存活率为92%；1d胰岛素释放量高糖组为788.56±77.53 mIU/胰岛,低糖组为158.37±28.44 mIU/胰岛；165-180 d猪胰岛素释放量高糖组为679.58±68.69 mIU/胰岛,低糖组为102.43±23.12 mIU/胰岛；显微镜下HE染色测量结果1d猪胰岛直径一般为35±10μm,60 d猪胰岛直径一般为62±20μm,120 d龄猪胰岛直径一般为94±30 μm,165-180 d猪胰岛直径一般为158±60μm；DTZ染色测量结果1d猪胰岛直径一般为33±9μm,60 d猪胰岛直径一般为64±20 μm,120 d龄猪胰岛直径一般为91±32 μm,165-180 d猪胰岛直径一般为143±54μm。由此可知,出生后不同阶段猪胰腺胰岛分离纯化的条件存在差异,1 d、60 d猪胰岛分离纯化的最佳条件为热缺血时间小于10min、冷缺血时间小于30 min、胶原酶V浓度为1.0 mg/ml、消化时间为15 min,而120 d、165-180 d日龄猪胰岛分离纯化最佳条件为热缺血时间小于10 min、冷缺血时间小于30 min、胶原酶V浓度为1.5 mg/ml、消化时间为15 min。1 d和120 d长白猪胰岛分化能力、胰岛数量及胰岛释放量优于120 d和165-180 d长白猪。
【关键词】：猪 胰岛 胶原酶V 分离纯化
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.1
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 前言11-18
• 1 胰岛分离和纯化11-13
• 1.1 胰岛分离11-12
• 1.2 胰岛纯化12-13
• 2 胰腺形态结构与功能13-14
• 3 糖尿病14-15
• 4 异种间移植15-16
• 5 供体选择16
• 6 排斥反应16-17
• 7 意义17-18
• 材料与方法18-25
• 1 材料18-20
• 1.1 取材18
• 1.2 主要药品18-19
• 1.3 主要仪器设备19-20
• 1.4 药品的配制20
• 2 方法20-25
• 2.1 猪胰岛分离20-21
• 2.2 猪胰岛纯化21-22
• 2.3 胰岛计数及纯度22
• 2.4 胰岛活性22
• 2.5 胰岛体外功能测定22
• 2.6 猪胰腺石蜡组织切片制作22-23
• 2.7 猪胰腺石蜡组织切片的HE染色方法23-24
• 2.8 猪胰腺胰岛的免疫组化染色24
• 2.9 统计学处理24-25
• 结果25-34
• 1 猪胰腺胰岛的分离、纯化状态25-26
• 2 不同日龄猪胰腺胰岛的形态观察26-29
• 3 热缺血时间分离纯化后胰岛获取量和存活率29-30
• 4 冷缺血时间分离纯化后胰岛获取量和存活率30-31
• 5 不同消化时间和胶原酶浓度胰岛收获量31-32
• 6 不同日龄猪胰岛收获量、纯度及存活率32
• 7 猪胰岛素释放试验32-34
• 讨论34-37
• 1 猪胰岛分离纯化34-35
• 2 猪胰岛分离纯化影响因素35-36
• 3 猪胰腺胚后发育规律36-37
• 结论37-38
• 参考文献38-45
• 致谢45-46
• 作者简介46

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1 周毅;许评;王平兰;宋纯;宋春芳;Jonathan R.T.Lakey;;影响成人高质量胰岛分离的关键因素分析[J];中华肝胆外科杂志;2006年01期

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本文编号：986813