七叶莲总三萜抗类风湿性关节炎药效及其机制探究

发布时间：2017-10-07 16:20

  本文关键词：七叶莲总三萜抗类风湿性关节炎药效及其机制探究

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【摘要】：类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是世界范围内严重危害公众健康的全身性自身免疫性疾病,发病机制复杂,致残率高。本研究以中药七叶莲提取物七叶莲总三萜为研究对象,从体内动物实验及体外细胞实验两方面,考察其抗类风湿性关节炎药效学作用,并初步探讨七叶莲总三萜抗类风湿性关节炎的作用机制。本课题的主要研究内容包括以下五个方面:1.采用正交试验设计考察七叶莲总三萜的最佳提取工艺,并利用AB-8型大孔吸附树脂对七叶莲总三萜粗提物进行纯化,考察其最佳纯化工艺。研究表明,七叶莲总三萜的最佳提取工艺为以95%乙醇为溶剂,料液比1:10,回流提取60min,提取1次。通过AB-8型树脂纯化七叶莲总三萜实验可得最佳纯化工艺为:以自然pH条件下的样液上样,上样浓度为0.884 mg/mL,最大上样量6 BV,用8 BV的80%乙醇进行洗脱。2.建立小鼠耳廓肿胀,羧甲基纤维素钠(CMC-Na)致白细胞游走急性炎症模型,考察七叶莲总三萜的抗炎作用。研究表明,七叶莲总三萜可显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀程度,并可显著抑制CMC-Na致白细胞游走,表明其具有抗急性炎症作用。3.建立醋酸致小鼠扭体反应疼痛模型,考察七叶莲总三萜的镇痛作用。结果证实,七叶莲总三萜可显著抑制醋酸所致的小鼠疼痛反应,镇痛作用显著,较七叶莲片作用更为明显。4.建立大鼠佐剂性关节炎模型,从佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠足跖肿胀度、关节炎评分、免疫器官系数变化、血清中细胞因子以及关节滑膜组织中皮质醇(Cor)和循环免疫复合物(CIC)的水平变化这几个方面来考察七叶莲总三萜抗RA的作用和机理。研究表明,七叶莲总三萜可以改善AA大鼠的足跖肿胀及多发性关节炎现象,恢复AA大鼠细胞免疫功能,并可显著抑制AA大鼠血清中炎症因子及滑膜组织中Cor和CIC的分泌,提示这可能是其抗RA作用机制。5.利用脂多糖(LPS)刺激,建立RAW264.7小鼠巨噬细胞体外炎症模型,分别采用ELISA法和Griess法,检测巨噬细胞分泌的细胞因子及炎症介质的水平变化,考察七叶莲总三萜的体外抗炎活性。研究表明,七叶莲总三萜能够在体外拮抗LPS诱导的炎症模型的损伤程度,具有较强的抗炎作用。七叶莲总三萜抗炎镇痛效果显著,可明显改善AA大鼠各项炎症指标,具有良好的抗RA作用,其抗炎机制为对细胞因子网络平衡的调节。
【关键词】：七叶莲总三萜 类风湿性关节炎 抗炎镇痛 巨噬细胞 细胞因子
【学位授予单位】：华侨大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R593.22
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 第1章 引言11-17
• 1.1 课题的立题依据及意义11
• 1.2 七叶莲药理作用研究进展11-16
• 1.2.1 化学成分12-13
• 1.2.2 药理作用13-15
• 1.2.3 展望15-16
• 1.3 研究思路16-17
• 第2章 七叶莲总三萜的提取工艺及纯化工艺17-27
• 2.1 引言17
• 2.2 实验材料17-18
• 2.2.1 实验药品17
• 2.2.2 实验试剂17
• 2.2.3 实验仪器17-18
• 2.3 实验方法18-21
• 2.3.1 七叶莲总三萜提取方法的考察18-19
• 2.3.2 七叶莲总三萜纯化工艺的考察19-21
• 2.4 实验结果21-25
• 2.4.1 七叶莲总三萜提取工艺结果分析21-22
• 2.4.2 上样液浓度对吸附性能的影响22-23
• 2.4.3 上样液pH值对吸附性能的影响23
• 2.4.4 最大上样量的考察23-24
• 2.4.5 最适洗脱剂浓度的考察24
• 2.4.6 洗脱剂用量的考察24-25
• 2.4.7 验证试验25
• 2.5 讨论25-27
• 第3章 七叶莲总三萜的抗炎镇痛作用27-51
• 3.1 引言27
• 3.2 实验材料27-28
• 3.2.1 实验动物27
• 3.2.2 实验试剂27-28
• 3.2.3 实验仪器28
• 3.3 实验方法28-33
• 3.3.1 七叶莲总三萜对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响28-29
• 3.3.2 七叶莲总三萜对醋酸所致小鼠扭体反应的影响29
• 3.3.3 七叶莲总三萜对CMC-Na致白细胞游走的影响29
• 3.3.4 七叶莲总三萜对大鼠佐剂性关节炎的作用29-32
• 3.3.5 统计学分析32-33
• 3.4 实验结果33-45
• 3.4.1 七叶莲总三萜对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响33
• 3.4.2 七叶莲总三萜对醋酸所致小鼠扭体反应的影响33-34
• 3.4.3 七叶莲总三萜对CMC-Na致白细胞游走的影响34
• 3.4.4 七叶莲总三萜对大鼠佐剂性关节炎的作用34-45
• 3.5 讨论45-51
• 3.5.1 七叶莲总三萜对急性炎症的作用45
• 3.5.2 七叶莲总三萜镇痛活性的研究45-46
• 3.5.3 七叶莲总三萜对类风湿性关节炎的作用46-51
• 第4章 七叶莲总三萜对LPS诱发RAW264.7 巨噬细胞炎症模型的作用51-59
• 4.1 引言51
• 4.2 实验材料51-52
• 4.2.1 实验试剂51-52
• 4.2.2 实验仪器52
• 4.3 实验方法52-54
• 4.3.1 细胞培养52
• 4.3.2 七叶莲总三萜对RAW264.7 巨噬细胞活力的影响52-53
• 4.3.3 七叶莲总三萜对LPS诱导RAW264.7 巨噬细胞炎症介质NO的影响53
• 4.3.4 七叶莲总三萜对LPS诱导RAW264.7 巨噬细胞细胞因子分泌的影响53-54
• 4.4 实验结果54-57
• 4.4.1 七叶莲总三萜对RAW264.7 巨噬细胞活力的影响54
• 4.4.2 七叶莲总三萜对LPS诱导RAW264.7 巨噬细胞释放NO的影响54-55
• 4.4.3 七叶莲总三萜对LPS诱导RAW264.7 巨噬细胞细胞因子分泌的影响55-57
• 4.5 讨论57-59
• 第5章 总结与展望59-61
• 5.1 结论59
• 5.2 展望59-61
• 参考文献61-67
• 致谢67-69
• 个人简历、在学期间发表的学术论文及研究进展69

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本文编号：988847