敲减NADPH氧化酶4能降低STAT3活性抑制人黑色素瘤A375细胞的增殖

发布时间：2017-10-11 15:29

  本文关键词：敲减NADPH氧化酶4能降低STAT3活性抑制人黑色素瘤A375细胞的增殖

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【摘要】：NADPH氧化酶参与细胞活性氧族(ROS)的生成过程,而ROS与肿瘤细胞增殖密切相关.为了阐明NADPH氧化酶影响黑色素瘤A375细胞增殖的分子机制,本文首先应用荧光定量PCR和Western印迹证实NOX4为人黑色素瘤A375细胞的NADPH氧化酶功能核心亚基;随后根据NOX4基因设计3条干扰序列和对照序列并连接到p Super-retro-puro载体,经鉴定后转化E.coli DH5α感受态细胞、筛选有效干扰序列并用于逆转录病毒包装,病毒液感染A375细胞并经嘌呤霉素筛选10d,构建了NOX4缺陷的A375稳转细胞珠(A375-NOX4Δ),其NOX4的mRNA和蛋白表达分别下降了66.02%和77.35%,伴随NADPH氧化酶活性和ROS水平分别下降了79.17%和64.16%;MTT、Ed U法检测显示,A375-NOX4Δ细胞的增殖能力比A375-WT细胞明显降低、倍增时间延长,增殖细胞数量下降了68.27%(P0.01),呈现G1→S期阻滞;Western blot检测表明A375-NOX4Δ细胞的cyclin D1、CDK4分别下降了55.7%(P0.01)和64.8%(P0.01),而P53、P21分别增加了6.89倍(P0.01)和3.27倍(P0.01),STAT3、P-STAT3分别下降了51.80%(P0.05)和82.58%(P0.01);电泳迁移率变动分析(EMSA)表明,A375-NOX4Δ细胞的STAT3-DNA结合活性明显降低.上述结果提示,敲减A375细胞的NOX4表达可能通过减少ROS生成使得STAT3磷酸化水平及其结合DNA的活性下降,最终导致A375-NOX4Δ细胞增殖减少、呈现G1→S期阻滞,这为黑色素瘤发病机制研究提供了新思路及可能的药物作用靶点.
【作者单位】： 昆明医科大学生物化学与分子生物学系;中国人民解放军65426医院;云南省妇幼保健院;
【关键词】： NADPH氧化酶 黑色素瘤 细胞增殖 信号传导及转录激活因子
【基金】：国家自然科学基金(No.81160246,81460421) 云南省科技计划重点项目(No.2013FB102)~~
【分类号】：R739.5
【正文快照】： *联系人Tel:0871-5922854;E-mail:zhuyuechun20091119@163.com錛并列第一作者*Corresponding author Tel:0871-65922854;E-mail:zhuyuechun20091119@163.com錛Two authors contributed to this work equallyKnockdown of NADPH Oxidase 4 Affects Proliferation via ReducingS

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本文编号：1013309