白藜芦醇在黑色素瘤小鼠体内的药动药效及PK-PD结合模型研究

发布时间：2017-10-17 20:23

  本文关键词：白藜芦醇在黑色素瘤小鼠体内的药动药效及PK-PD结合模型研究

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【摘要】：第一部分白藜芦醇在黑色素瘤小鼠体内的药代动力学研究 目的：探索白藜芦醇（resveratrol, Res）单次及多次给药后，C57BL/6荷黑色素瘤小鼠体内，Res及其主要代谢产物葡萄糖醛酸结合物(resveratrol-glucuronide,Res-G）和硫酸结合物(resveratrol-sulfate, Res-S)的药代动力学特征，并建立相应的PK模型，为PK-PD结合模型提供合适的药代动力学驱动因素PK input。方法：1)以水杨酸为内标，建立可同时测定血浆中Res及主要代谢物Res-G和Res-S的高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）检测方法。2)建立C57BL/6小鼠皮下移植B16F10黑色素瘤模型，单次灌胃给予低、高剂量Res（50、100mg/kg）后，分别于给药前及给药后0.083、0.167、0.333、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0h经眼眶内呲静脉丛采血，用上述建立的HPLC-MS/MS方法检测Res及Res-G，Res-S的血药浓度，WinNonlin软件进行Res及Res-G，Res-S的药动学（pharmacokinetics, PK）模型模拟拟合，并计算药动学参数；3) C57BL/6荷黑色素瘤小鼠灌胃给予低、高剂量Res（50、100mg/kg/d），连续给药21d，分别在第3,6,9,12,15,18,21d采样，于当天给药后0.167、1.0、2.0、4.0h经眼眶内呲静脉丛采血，检测血药浓度。参考单次给药药动学参数，结合多次给药有限采样的实测血药浓度，采用WinNonlin软件建立Res长期给药过程中PK模型，模拟拟合Res及Res-G，Res-S的药时曲线，并计算多次给药药代动力学参数。 结果：结果：黑色素瘤小鼠单次灌胃给予Res后，药物在体内表现出较快的吸收和消除，代谢物Res-G的血药浓度及明显高于Res，Res-S的血药浓度与Res接近；多次给药过程中，AUC增加，，清除率降低，Res及Res-G、Res-S均表现出一定程度的蓄积。 结论： Res在体内吸收消除较快，并快速转化为代谢物，Res-G、Res-S是其循环过程中的主要存在形式；多次给药过程中，黑色素瘤病情进展可影响Res原型及代谢物使之蓄积。 第二部分白藜芦醇在黑色素瘤小鼠体内的药效动力学研究 目的：研究在黑色素瘤发生发展过程中及Res给药治疗过程中，肿瘤体积，Tyrosinase，COX-2, Ape/Ref-1, VEGFA及Survivin的动态变化规律，为PK-PD结合模型提供合适的药效替代指标PD endpoint。 方法：1）建立C57BL/6小鼠皮下移植B16F10黑色素瘤模型，分为3组：模型对照组（0.5%CMC-Na），低、高剂量Res组（50、100mg/kg/d），连续灌胃21d，监测肿瘤体积；分别于开始给药后第3，6，9，12，15，18，21d分批处死动物，剖取肿瘤组织；2）提取mRNA，普通PCR扩增后回收，构建重组质粒标准品，绘制标准曲线，采用绝对实时荧光定量RT-PCR法检测Tyrosinase，COX-2,Ape/Ref-1,VEGFA, Survivin的mRNA表达；制备组织匀浆，BCA法测总蛋白浓度，采用相应的ELISA试剂盒检测上述各指标的蛋白表达；制备酶液，通过检测催化特异性底物的反应，计算Tyrosinase和COX-2的酶活性；提取细胞核蛋白，采用DNA-binding Elisa法检测Ape/Ref-1的氧化还原活性； 结果：随着时间推移，荷瘤小鼠肿瘤体积逐渐增大，Tyrosinase, COX-2及Survivin的活性或表达逐渐升高，Ape/Ref-1先升后降, VEGFA初期无明显变化,在第9-12天开始上升；Res能够降低肿瘤生长速度，下调COX-2,Ape/Ref-1, VEGFA, Survivin的mRNA和蛋白表达，同时抑制Tyrosinase，COX-2和Ape/Ref-1的活性，但对Tyrosinase的mRNA和蛋白表达无明显影响，上述作用呈动态变化。 结论：Tyrosinase，COX-2, Ape/Ref-1, VEGFA及Survivin在黑色素瘤的发生发展过程中呈动态变化，Res可抑制小鼠黑色素瘤生长，并从不同水平影响上述各指标 第三部分白藜芦醇在黑色素瘤小鼠体内的PK-PD结合模型研究 目的：建立PK-PD结合模型，量化Res的药代动力学与药效动力学之间的关联，阐明Res的药动学行为与药理学效应之间的“矛盾”，有助于阐明Res的作用机制，明确作用靶标。 方法：1）分别将Res及代谢物的血药浓度C和药时曲线下面积AUC，与不同的药效指标进行模型拟合，明确药代动力学过程的驱动因素PK input。2）根据上述确定的PK input，分别采用不同的药效动力学模型和初始参数，建立可定量描述PK input与肿瘤体积之间关系的PK-PD结合模型。3）将PK input的动态变化，分别在活性、mRNA表达及蛋白表达水平，与Tyrosinase，COX-2,APE/Ref-1, VEGFA,Survivin等药理效应指标进行拟合，选择相关性较好的效应指标作为PD endpoint。4）选择合适的药代动力学模型和药效动力学模型,建立联接PK input和PDendpoint的PK-PD结合模型，得到模型动力学参数，明确Res的药代动力学与药效动力学之间的定量关系 结果：1）相比血药浓度C，Res及代谢物的总药时曲线下面积AUCRes-Total的能够较好地与各药效指标拟合，可作为PK input获得较满意的PK-PD模型。2）指数方程结合Sigmoid Emax模型可较好地量化拟合肿瘤体积与AUCRes-Total的关系。3）Simple Emax可较好地拟合COX-2酶活性、mRNA及蛋白表达与AUCRes-Total的关系。4）Sigmoid Emax模型可较好地量化拟合Tyrosinase的活性, VEGFA、Survivin的mRNA及蛋白表达与AUCRes-Total的关系。 结论：1）主要代谢物Res-G，Res-S在Res的体内活性中起到重要作用，这可能与代谢物在肿瘤组织中重新解离成原型发挥作用或代谢物本身的活性有关。2）以COX-2、Tyrosinase的酶活性, COX-2、VEGFA、Survivin的mRNA及蛋白表达作为PD endpoint建立了相应的PK-PD模型，可定量描述上述效应指标的变化与Res及代谢物的药代动力学的关联。
【关键词】：白藜芦醇 单次药代动力学 多次药代动力学 白藜芦醇葡萄糖醛酸结合物 白藜芦醇硫酸结合物 白藜芦醇 酪氨酸酶 环氧合酶-2 氧化还原因子1 血管内皮生长因子 生存蛋白 白藜芦醇 PK input PD endpoint PK-PD模型 E_(max)模型
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-11
• ABSTRACT11-15
• 前言15-23
• 参考文献20-23
• 第一部分 RES 在黑色素瘤小鼠体内的药代动力学研究23-39
• 引言23-24
• 材料和方法24-28
• 结果28-36
• 讨论36-37
• 参考文献37-39
• 第二部分 RES 在黑色素瘤小鼠体内的药效动力学研究39-64
• 引言39
• 材料和方法39-53
• 结果53-59
• 讨论59-62
• 参考文献62-64
• 第三部分 RES 在黑色素瘤小鼠体内的 PK-PD 结合模型研究64-84
• 引言64
• 方法64-65
• 结果65-79
• 讨论79-82
• 参考文献82-84
• 全文总结84
• 创新点84-85
• 综述85-94
• 参考文献90-94
• 附录94-95
• 感言95-97

【参考文献】

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1 于智勇;沈维干;薛庆於;武辉;;AdH1-siRNA-Survivin抗小鼠黑色素瘤生长和转移的研究[J];第三军医大学学报;2008年18期

2 刘艳杰;王倩;姜民;李红艳;邹敏杰;白钢;;基于谱效-构效关系筛选大黄中酪氨酸酶活性抑制成分的方法研究[J];中草药;2012年11期

本文编号：1050858