ⅡA分泌型磷脂酶A2与银屑病皮损关系的研究

发布时间：2017-10-21 22:23

  本文关键词：ⅡA分泌型磷脂酶A2与银屑病皮损关系的研究

  更多相关文章： 分泌型磷脂酶A2-IIA 银屑病 免疫组织化学 酶联免疫吸附试验 逆转录聚合酶链式反应

【摘要】：研究目的与内容:研究目的:从组织学和分子生物学角度探讨sPLA2-ⅡA在银屑病皮损组织中表达,揭示其与银屑病发病的相互关系,以证实sPLA2-ⅡA在银屑病皮损发病中的作用,为银屑病临床早期诊断和治疗提供依据和指导。研究内容:通过免疫组化方法,检测sPLA2-ⅡA在银屑病皮损组织中的表达;通过酶联免疫吸附实验,检测血清中sPLA2-ⅡA的含量;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测sPLA2-ⅡA mRNA表达水平,从这几个方面共同阐明sPLA2-ⅡA表达水平与银屑病发病的关系,具体内容如下:1.通过皮损面积和皮损严重程度指数(PASI评分)来分析两者之间的关系,调查了解相关病例临床信息(例如遗传史、过敏史等)。2.采用免疫组织化学方法,对银屑病患者躯干或四肢部位的皮损进行sPLA2-ⅡA指标评价。3.应用PASI评分分析银屑病患者组织中sPLA2-ⅡA表达水平与银屑病严重程度的相关性。同时对研究对象外周血sPLA2-ⅡA含量进行检测。4.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测研究对象皮肤组织中sPLA2-ⅡA mRNA的表达水平。方法:银屑病皮损标本是从患者躯干或四肢的典型皮损处采取,非银屑病对照组标本是从其躯干或四肢部位的正常皮肤采取(从外科及骨科手术中获得),标本部分留取以制备蜡块切片,余下部分液氮冻存以备提取总RNA待进行相关分子生物学实验;采用免疫组织化学方法检测银屑病皮损样本和对照组样本sPLA2-ⅡA表达水平;采用酶联免疫吸附方法从血清学水平检测研究对象外周血sPLA2-ⅡA的含量变化;应用常规RT-PCR方法,从mRNA水平检测研究对象皮肤组织中sPLA2-ⅡA的表达情况。从组织学、血清学以及分子生物学三个角度共同揭示sPLA2-ⅡA的表达变化与银屑病皮损发病的相互关系,为进一步预防、治疗银屑病提供理论依据。结果:皮损严重程度和PASI评分呈正相关;免疫组织化学方法发现sPLA2-ⅡA在银屑病皮损组织中的表达显著高于躯干或四肢部位的正常皮肤,即对照组的皮肤组织;酶联免疫吸附试验的方法发现银屑病皮损患者的血清中sPLA2-ⅡA含量明显高于对照组;RT-PCR检测银屑病皮损组和对照组sPLA2-ⅡA的mRNA表达水平,发现皮损组明显高于对照组sPLA2-ⅡA水平,以上结果均提示sPLA2-ⅡA是银屑病发病的重要特异性靶分子,sPLA2-ⅡA有可能对银屑病的分子诊断有帮助,未来会成为靶向治疗的新靶标。结论:本研究通过免疫组化染色发现sPLA2-IIA在真皮层中高表达,真皮乳头血管周围细胞浆中可见棕黄色颗粒,这一点与许多国内外的研究结论相符,我们通过免疫组化方法还发现在银屑病表皮上层中sPLA2-IIA表达升高显著,这一点类似于分化异常的角质化细胞。酶联免疫吸附试验的方法发现银屑病皮损患者的血清中sPLA2-ⅡA含量明显高于对照组。采用RT-PCR方法检测到银屑病皮损组sPLA2-IIA的mRNA表达水平明显增高,这一结果提示银屑病患者可能在基因转录水平上激活了sPLA2-IIA,为临床上进一步提高检测敏感性奠定了实验基础。综上所述:我们的实验结果显示sPLA2-ⅡA的表达变化与银屑病皮损关系密切,鉴于其它磷脂酶亚型的表达在正常和银屑病表皮中的表达未见报道,因此,本研究认为PLA2-IIA今后可能会成为银屑病分子诊断和靶向治疗的新靶点。
【关键词】：分泌型磷脂酶A2-IIA 银屑病 免疫组织化学 酶联免疫吸附试验 逆转录聚合酶链式反应
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 缩略语9-11
• 前言11-15
• 研究现状、成果12-13
• 研究方法、路线13-15
• 一、免疫组织化学方法检测皮肤标本sPLA2-ⅡA的表达水平15-23
• 1.1 对象和方法15-19
• 1.1.1 实验材料15-17
• 1.1.2 实验方法17-19
• 1.2 结果19-21
• 1.2.1 银屑病患者皮损和对照组皮肤组织中sPLA2 IIA表达19-20
• 1.2.2 银屑病患者sPLA2 IIA表达阳性细胞数分布20
• 1.2.3 银屑病患者PASI评分与sPLA2 IIA表达的关系20-21
• 1.3 讨论21-22
• 1.4 小结22-23
• 二、ELISA法检测外周血sPLA2-ⅡA含量23-30
• 2.1 材料和方法23-27
• 2.1.1 实验材料23-24
• 2.1.2 实验方法24-27
• 2.2 结果27-28
• 2.2.1 生化指标检测27
• 2.2.2 sPLA2ⅡA指标检测27-28
• 2.3 讨论28-29
• 2.4 小结29-30
• 三、RT-PCR检测sPLA2 IIA mRNA在银屑病患者皮肤组织表达30-39
• 3.1 实验材料和方法30-36
• 3.1.1 实验主要试剂30-31
• 3.1.2 仪器和设备31
• 3.1.3 实验方法31-36
• 3.1.4 统计处理并分析36
• 3.2 结果36-37
• 3.2.1 经紫外光分光密度仪检测提取的总RNA36
• 3.2.2 2%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定36
• 3.2.3 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增sPLA2 IIA的mRNA36-37
• 3.3 小结37-38
• 3.4 讨论38-39
• 结论39-41
• 参考文献41-44
• 发表论文和参加科研情况说明44-45
• 综述 磷脂酶A2及其亚型的研究进展45-65
• 综述参考文献58-65
• 致谢65-66
• 个人简历66

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本文编号：1075509