藏雪莲水提取物减轻UVB辐射后HaCaT细胞凋亡的机制研究

发布时间：2017-11-02 17:03

  本文关键词：藏雪莲水提取物减轻UVB辐射后HaCaT细胞凋亡的机制研究

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【摘要】：目的:研究藏雪莲(Saussurea medusa Maxim.)水提取物对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)照射人永生化角质形成细胞(HaCaT)后细胞凋亡影响研究。方法:将HaCaT细胞分为空白组、UVB照射组(30m J/cm2)、藏雪莲水提取物组(30m J/cm2UVB+10mg/m L藏雪莲水提取物组)。台盼蓝染色观察细胞形态及死亡情况;MTS法检测细胞增殖活性;酶标法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力、细胞丙二醛(MDA)及谷胱甘肽(GSH)含量;流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位及细胞内钙离子(Ca2+)含量;Elisa法测定B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达,Western Blotting及免疫荧光法检测Bcl-2、Bax、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的表达。结果:藏雪莲水提取物明显恢复HaCaT细胞形态,降低细胞蓝染数量,改善细胞死亡碎片及脱片现象,促进HaCaT增殖,降低SOD、CAT活性及GSH含量,增加MDA含量(P0.05),降低UVB辐射后HaCaT细胞凋亡及细胞内Ca2+浓度,升高线粒体膜电位,能够升高UVB辐射后的Bcl-2蛋白,降低Bax蛋白(P0.05)及Caspase-3的表达。结论:藏雪莲水提取物能够通过降低HaCaT细胞凋亡来减轻UVB辐射后HaCaT细胞的氧化损伤。
【关键词】：藏雪莲水提取物 人永生化角质形成细胞 中波紫外线 细胞凋亡
【学位授予单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R758.1
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 主要符号对照表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料和方法12-20
• 2.1 材料12-13
• 2.1.1 细胞株12
• 2.1.2 主要仪器12
• 2.1.3 主要试剂12-13
• 2.2 主要试剂和溶液配制13-14
• 2.2.1 藏雪莲水提物的提取13-14
• 2.2.2 完全培养基的制备14
• 2.2.3 细胞冻存液的制备14
• 2.2.4 Western Blotting相关溶液的制备14
• 2.2.5 免疫荧光相关溶液的配制14
• 2.3 试验方法14-18
• 2.3.1 Ha Ca T细胞的培养14-15
• 2.3.2 实验分组15
• 2.3.3 台盼蓝染色15
• 2.3.4 MTS法检测细胞增殖15
• 2.3.5 SOD、GSH、CAT、MDA检测15
• 2.3.6 细胞凋亡检测15-16
• 2.3.7 细胞内钙离子检测16
• 2.3.8 线粒体膜电位(Δψ)检测16
• 2.3.9 Elisa法检测Bax、Bcl-216-17
• 2.3.10 Western Blotting检测17-18
• 2.3.11 免疫荧光检测18
• 2.4 统计学处理18-19
• 2.5 技术路线19-20
• 第3章 实验结果20-27
• 3.1 台盼蓝染色20
• 3.2 MTS法20-21
• 3.3 SOD、GSH、CAT、MDA检测21-22
• 3.4 细胞凋亡检测22-23
• 3.5 细胞内钙离子检测23
• 3.6 线粒体膜电位(Δψ)检测23-24
• 3.7 Elisa法检测Bcl-2 蛋白、Bax蛋白24-25
• 3.8 Western Blotting检测25-26
• 3.9 免疫荧光染色26-27
• 第4章 讨论27-30
• 第5章 结论30-31
• 参考文献31-33
• 致谢33-34
• 作者简介34-35
• 综述35-40
• 参考文献38-40

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本文编号：1132353