大鼠间充质干细胞对小鼠黑色素瘤影响的实验研究

发布时间：2017-11-11 01:16

  本文关键词：大鼠间充质干细胞对小鼠黑色素瘤影响的实验研究

  更多相关文章： 间充质干细胞 黑色素瘤 贴壁性 血管

【摘要】：目的：恶性黑色素瘤（malignant melanoma,MM）来源于黑色素细胞，是一种恶性程度较高的具有黑色素细胞分化的恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的1%～2%，大部分发生于皮肤［1-2］，其次为直肠、肛门、生殖道、消化道、鼻窦、喉、肺等，也可发生于脉络膜及软脑膜处［3-5］。恶性黑色素瘤占皮肤肿瘤的7%～20%，近年来其发生率呈明显增高趋势。与黑色素瘤发生的相关因素有遗传、紫外线、色素痣等。因恶性黑色素瘤病理组织学和细胞学形态的多样性，部分肿瘤不含黑色素，容易误诊和漏珍。目前的治疗方法常采用手术、生物、放疗及化疗，但效果不甚理想。因此寻求疗效好、副作用小的治疗方法是当下研究的热点问题。 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)最早从骨髓中分离发现的,具有塑料贴壁性,呈纤维状,能够在体内外分化为脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞,也可向其它生殖系统分化。由于MSCs具有多潜能的分化特性,最早是用来修复组织。近年来研究表明,它还具有抗增殖和抗炎症的作用，同时还具有很好的迁移能力和肿瘤趋向性。在肿瘤生长的微环境中,肿瘤细胞及其周围的纤维基质可分泌各种细胞因子,能促进MSCs向肿瘤部位迁移集聚、增殖分化,进而影响肿瘤的生长。因此,关注和研究MSCs对肿瘤微环境的影响,MSCs用于临床抗肿瘤治疗研究方面有着重要的作用。 方法： 1用密度梯度离心法分离并纯化大鼠的骨髓间充质干细胞，并且将MSCs细胞培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基（含青霉素100U/ml，含链霉素100U/ml，PH7.2）中，放入37℃、5％CO2的培养箱内进行常规传代培养。 2通过诱导，让所得到的间充质干细胞通过向成骨细胞和神经元样细胞分化，来验证其作为干细胞具有多向分化的潜能。 3将B16恶性黑色素瘤细胞培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基（含青霉素100U/ml，含链霉素100U/ml，PH7.2）中，放入37℃、5％CO2的培养箱内进行常规传代培养。 4黑色素瘤动物模型的制备：将小鼠黑色素瘤细胞B16向小鼠后肢皮下注射，制备黑色素瘤动物模型。 5动物模型制备完成后，随机将小鼠分为A（对照组）、B（实验组）两组，每组6只。 6动物实验A组小鼠注射生理盐水，B组小鼠注射间充质干细胞。让小鼠自由进食水，观察并记录肿瘤的生长情况。 7间充质干细胞移植两周后将小鼠全部处死，取下A、B两组小鼠的肿瘤，做常规组织病理检查。 8统计学分析运用统计学软件SPSS对数据进行统计分析。 结果： 1以密度梯度离心法分离纯化的细胞，可逐步得到呈长梭形放射状排列的细胞。 2通过诱导，所得到的间充质干细胞可以向成骨细胞以及神经元样细胞分化。 3经皮下注射小鼠黑色素瘤细胞B16的小鼠，1周后成瘤，2周时肿瘤明显增大，小鼠活力正常。 4间充质干细胞移植两周后，小鼠活力正常，并将小鼠全部处死。A组小鼠部分肿瘤组织的顶端出现不同程度的破溃。B组小鼠未见明显异常。 5A组（对照组）小鼠肿瘤组织直径平均长度0.28cm，平均宽度0.18cm，平均湿重0.65g；B组（实验组）小鼠皮下脂肪基本消失，肿瘤直径长度平均直径2.35cm，平均宽度0.71cm；平均湿重7.90g，，部分肿瘤组织的顶端出现不同程度的破溃及出血。 6A组（对照组）显微镜下观察：大部分、真皮的结构正常，大量肿瘤细胞已侵袭真皮以下组织。肿瘤细胞大小不一，较大，染色深，呈紫黑色，可见较多核分裂。部分区域肿瘤组织密集排列，有成巢倾向，其周围可见纤维组织间隔，血管分布少，肿瘤细胞呈多角形；部分肿瘤组织呈弥漫性分布，肿瘤间质少，血管丰富，肿瘤细胞较大，呈圆心或椭圆形。肿瘤组织间血管丰富，管腔扩张，内充满红细胞，肿瘤组织密集排列区域，部分肿瘤细胞已侵入血管壁，管壁破坏，进入管腔内。间质可见淋巴细胞、中性粒细胞、浆细胞,有脂肪坏死。B（实验组）组显微镜下观察：肿瘤组织已侵入表皮下，接近基底膜带，核分裂象多见。肿瘤组织间血管数量明显增多，血管直径明显增大。炎细胞与A组（对照组）相比可见淋巴细胞（较多）、中性粒细胞（中量）、浆细胞（少）。可见较多脂肪坏死。 7B组小鼠肿瘤平均重量7.90g、肿瘤平均体积0.659mm3，与A组小鼠肿瘤平均重量0.65g、肿瘤平均体积0.009mm3相比有明显差异，统计分析P0.001，具有统计学意义。 结论： 1肿瘤体积明显增大，重量明显增加，MSCs对黑色素瘤的生长可产生明显的影响。 2肿瘤组织间血管数量明显增多。 3MSCs肿瘤组织间可见较多淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞及核尘，MSCs具有明显的免疫调节性。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.5

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 覃冠平;;黑色素瘤36例临床病理分析[J];吉林医学;2011年21期

2 赵志正;林洪生;;间质干细胞乳腺癌治疗的新靶点[J];现代肿瘤医学;2011年08期

3 李海;郑晓娟;;恶性黑色素瘤21例临床病理分析[J];现代中西医结合杂志;2012年03期

4 刘筱;许铁;;骨髓间充质干细胞免疫学特性及其移植治疗脊髓损伤[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年14期

5 纪小龙,徐薪,申明识;黏膜黑色素瘤的常见临床病理特点[J];诊断病理学杂志;2002年02期

6 陈军;徐祗顺;赵海峰;董德鑫;;骨髓间充质干细胞在兔肿瘤组织中的分布与分化[J];中华医学杂志;2007年33期

7 李玉升,屈凤莲,李峻岭,崔成旭,王金万,储大同;恶性黑色素瘤的生物治疗和生物化疗[J];中华肿瘤杂志;2000年05期

8 姜兰香;庞传超;姚春丽;;皮肤恶性黑素瘤病因学与生物学治疗进展[J];中国老年学杂志;2011年24期

本文编号：1169176