组织工程皮肤新模型的刺激试验研究

发布时间：2017-11-15 08:19

  本文关键词：组织工程皮肤新模型的刺激试验研究

  更多相关文章： 组织工程皮肤 HaCaT细胞 丝素蛋白 无纺布 皮肤刺激性 气-液培养 替代模型

【摘要】：目的构建以人永生化角质形成细胞HaCaT为种子细胞,丝素蛋白修饰聚酯/聚酰胺的无纺布支架的组织工程皮肤模型,并与动物实验作对比,观察这自制模型的灵敏度、特异度和准确性差别和优劣,为该组织工程皮肤模型取代动物模型提供相应的实验依据。方法1采用含血清的高糖培养基对HaCaT细胞进行培养,待细胞生长达到80%时,接种于丝素蛋白修饰的聚酯/聚酰胺的无纺布支架上,利用扫描电镜观察接种后第一天、第三天HaCaT细胞在支架上的生长状况与空白支架进行对照,检测HaCaT细胞在支架材料上的黏附和增殖情况。2以丝素蛋白修饰的聚酯/聚酰胺无纺布为支架,热塑形成托盘状,大小适合于24孔板,将成纤维细胞接种培养4天后,再接种人永生化角质形成细胞培养,待3天左右细胞相互融合长满支架时将模型气-液面培养2周,构建出检测用的组织工程皮肤模型。将培养不同时间的皮肤模型进行石蜡切片并常规HE染色,观察皮肤模型的细胞分层状态。3从欧洲替代方法实验验证中心(ECVAM)规定用于皮肤刺激性的物质中选取20种化学品,刺激物局部接触皮肤模型后,应用MTT比色法测定细胞相对活力,然后收集条件培养基用ELISA法检测IL-1α因子,评价构建的皮肤模型的灵敏度和特异性。4将20种化学品在动物体内进行急性经皮试验,根据红斑、水肿等皮肤反应来评价化学品的皮肤刺激强度。结果1丝素蛋白修饰用热塑形成托盘状的聚酯/聚酰胺复合无纺布支架,其本身形成许多微孔结构有一定的通透性,HaCaT细胞能在支架上良好的生长并可以黏附在无纺布纤维上。2将HaCaT细胞和成纤维细胞成功接种到丝素蛋白修饰的聚酯/聚酰胺复合无纺布支架上气-液培养2周后,HE染色法和扫描电镜的观察初步形成15层左右复层细胞层与天然细胞的层数很相似,但未形成角质层。3选取了20种化学品在组织工程皮肤模型上成功的进行了检测,结果显示皮肤模型的敏感性为72.7%,特异性为77.8%,准确率为75%。4构建的皮肤模型与动物模型作对比,有4种化学品判断出现错误。结论1成功制备了以丝素蛋白修饰的用热塑形成托盘状的聚酯/聚酰胺复合无纺布支架,为本课题研究提供较好的支架材料。2以HaCaT细胞为种子细胞在丝素蛋白修饰的无纺布支架上生长一段时间能进行分化和分层,已经初步构建组织工程皮肤模型。3利用体外构建的组织工程皮肤模型对ECVAM规定的检测物质中选取20种化学品进行检测,结果显示自己构建的皮肤模型的检测的准确率达到75%左右。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R751

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本文编号：1189040