Rab23对鳞癌细胞增殖的抑制作用及机制的初步探讨

发布时间：2017-11-19 21:09

  本文关键词：Rab23对鳞癌细胞增殖的抑制作用及机制的初步探讨

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【摘要】：皮肤鳞状细胞癌（cutaneous squamous cell carcinoma, cSCC）是皮肤科最常见的恶性肿瘤之一，占非黑素源性恶性肿瘤的20%，仅次于基底细胞癌（basal cellcarcinoma，BCC），具有侵袭性，可发生早期转移。近几十年来，皮肤鳞癌的发病率呈进行性增加，危害人类的身体健康，，因此对鳞癌发生、发展的研究具有重要的临床意义。 Rab23是小GTP酶Rab家族成员，也是Hedgehog信号通路的负调控因子，不仅具有囊泡转运的功能，而且在多种肿瘤中发挥不同的作用。课题组前期实验发现Rab23在皮肤鳞癌组织中高表达，并能够促进鳞癌细胞的侵袭，但Rab23对鳞癌细胞生长增殖的作用尚不清楚，因此本课题通过设计如下实验，研究Rab23对鳞癌细胞生长增殖的影响，并对机制做初步探索。 主要实验方法和结果： 1. Rab23对鳞癌Sa3细胞生长增殖的影响 1)选取口腔鳞癌Sa3细胞株，构建稳定过表达和干涉Rab23的Sa3细胞株；Western blot实验检测Rab23表达。结果显示：过表达Rab23组融合蛋白转染成功，干涉Rab23组，其表达较空载体组下降； 2)平板克隆形成实验检测Rab23对Sa3细胞增殖的影响。结果显示：过表达Rab23组较对照组相比，细胞增殖能力降低，干涉Rab23组较空载体组相比细胞增殖能力明显提高； 3)流式细胞仪检测Rab23对Sa3细胞周期的影响。结果显示：过表达Rab23可引起Sa3细胞G1期阻滞，影响细胞周期进程； 4) CCK8实验检测Rab23对Sa3细胞生长的影响。结果显示：与对照组相比，过表达Rab23组细胞生长能力降低，干涉Rab23组生长能力增高。 2. Rab23抑制鳞癌Sa3细胞生长增殖机制的初步探讨 1) Western blot检测Rab23对Hedgehog信号通路分子Gli1、Gli2表达的影响。结果显示：稳定转染过表达Rab23组和干涉Rab23组其Hedgehog信号通路重要的转录因子Gli1、Gli2表达水平与对照组和空载体组相比未见明显变化； 2) Western blot检测Rab23对细胞Erk1/2、p-Erk1/2表达的影响。结果显示：过表达Rab23组和干涉Rab23组较对照组和空载体组相比Erk1/2表达水平无明显变化；与对照组相比，过表达Rab23组p-Erk表达水平降低，而干涉Rab23组较空载体组相比p-Erk表达水平升高。 3) Western blot检测Rab23对细胞周期相关蛋白表达的影响。结果显示：CyclinE在各组细胞中的表达水平未见明显变化；与对照组相比，过表达Rab23组Cyclin D1表达水平降低，而干涉Rab23组较空载体组相比Cyclin D1表达水平升高。 主要结论： 1) Rab23对鳞癌Sa3细胞的生长增殖具有抑制作用； 2) Rab23可能不通过Hedgehog信号通路来抑制鳞癌Sa3细胞的生长增殖； 3) Rab23抑制鳞癌Sa3细胞生长增殖可能是通过调控Erk MAPKs信号通路发挥作用； 4) Rab23下调鳞癌Sa3细胞周期蛋白Cyclin D1的表达引起Sa3细胞G1期阻滞，从而对细胞周期进程产生影响。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.5

【参考文献】

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本文编号：1204906