二苯乙烯苷对中波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化的保护作用研究

发布时间：2017-11-29 16:11

  本文关键词：二苯乙烯苷对中波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化的保护作用研究

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【摘要】：目的采用中波紫外线(ultraviolet B, UVB)低剂量、反复多次照射体外培养的人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast, HSF),模拟皮肤细胞光老化。在此基础上,研究二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-beta-D-glucoside, TSG)对UVB诱导的应激性提早衰老(stress-induced premature senescence, SIPS)的HSF的保护性干预作用。方法1.UVB诱导人皮肤成纤维细胞进入应激性提早衰老(SIPS)状态UVB小剂量、多次照射皮肤成纤维细胞,倒置显微镜观察细胞形态改变、台盼蓝染色法计算细胞存活率、p-半乳糖苷酶(senescence-associated bgalactosidase, Sa-P-gal)染色检测衰老细胞,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)测定细胞上清液中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的含量变化,TBA法、WST-1法、紫外比色法分别检测细胞裂解液中丙二醛(maleic dialdehyde, MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活力,找到最适UVB照射剂量,构建体外皮肤细胞早衰模型。2.二苯乙烯苷(TSG)对应激性早衰的成纤维细胞的影响在皮肤早衰模型的基础上用不同浓度二苯乙烯苷进行干预,实验分成空白对照组(不做处理),UVB-SIPS组(单纯照光),0.5mmol/L TSG组(单纯加药),UVB+0.02mmol/LTSG组、UVB+0.1mmol/LTSG组、UVB+0.5mmol/L TSG组(UVB照射联合药物处理)。采用细胞计数法(CCK-8)检测细胞增殖活性,细胞化学染色法检测衰老相关Sa-β-gal的表达;TBA法、WST-1法、紫外比色法分别检测细胞裂解液中MDA含量及SOD活性；ELISA法测定细胞上清液中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的含量变化。采用单因素方差分析进行数据统计分析。结果1.UVB辐射剂量累积达到60mJ/cm2时,细胞衰老p-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)化学染色结果呈强阳性,ELISA法检测细胞上清液中MMP-1分泌显著增加,提示这个剂量照射后细胞进入衰老状态；倒置显微镜下观察,细胞变得扁平、宽大,胞浆透明,胞核内颗粒增多；酶化学法检测细胞裂解液中超氧化物歧化酶(SOD)活力明显下降,丙二醛(MDA)水平升高；结果表明HSF经UVB亚毒剂量、重复多次照射诱导后进入SIPS状态。2. UVB+0.02mmol/L TSG组、UVB+O.lmmol/L TSG组、UVB+0.5mmol/L TSG组以及UVB-SIPS组细胞增殖活性(A450)依次为0.3177±0.0175、0.3352±0.0289、0.3546±0.0221、0.2325±0.0296(F=89.12,P0.05),β-半乳糖苷酶染色阳性率依次为(85.33±3.82)%、(57.50±6.27)%、(47.00±4.82)%、(90.33±3.55)%(F=297.50,P0.05；与UVB-SIPS组比较,除UVB+0.02mmol/L TSG组外,其他两组均P0.05)。与UVB-SIPS组相比,UVB+各浓度TSG组细胞MDA含量降低(F=775.8, P0.01), SOD活力增加(F=224.3,除UVB+0.02mmol/L TSG组P0.05外,其他各组均P0.05), MMP-1分泌减少(F=55.40,除UVB+0.02mmol/L TSG组P0.05外,其他各组均P0.05),各指标检测值的变化与TSG浓度之间呈一定依赖性。结论1.UVB小剂量、多次照射,累积剂量达到60mJ/cm2时,可诱导HSF细胞进入SIPS状态,可作为光老化生物学研究的体外细胞模型之一。2.二苯乙烯苷对于UVB照射人皮肤成纤维细胞的增殖有一定促进作用,并可有效抑制SA-β-Gal活化,减少细胞培养上清中MMP-1的含量,提高SOD抗氧化酶的活性,同时对抗UVB诱导的脂质过氧化作用。故其能一定程度抑制UVB诱导的HSF光老化。
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R751

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